■ 產(chǎn)品簡介

FastClone DH5α感受態(tài)細胞是一種可用于免復(fù)蘇快速轉(zhuǎn)化的高效化學感受態(tài)細胞，是實驗室較為常用的大腸桿菌菌株之一，廣泛用于基因克隆、藍白斑篩選、質(zhì)粒穩(wěn)定擴增等分子生物學實驗。該菌株缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA) 減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15是表達β -半乳糖苷酶α片段的一段基因，當M15缺失(△M15)時，lacZ基因雖然能表達ω片段，但不能表達α片段，β -半乳糖苷酶沒有活性。當帶有lacZ(α片段)基因的lac操縱子通過載體DNA(如pUC19)轉(zhuǎn)化到lacZ△M15基因型的感受態(tài)(如DH5α)時，在有IPTG (異丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情況下，IPTG作為乳糖的類似物與lacI阻遏蛋白結(jié)合而使lac操縱子不被抑制，從而利用α-互補性產(chǎn)生完整的β -半乳糖苷酶，β -半乳糖苷酶可分解底物X-gal (半乳糖類似物)，使其呈現(xiàn)藍色。因此，F(xiàn)astClone DH5α感受態(tài)可用于藍、白斑篩選。使用pUC19質(zhì)粒進行熱激活轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率可以高達1×108 cfu/μg DNA以上。

■ 產(chǎn)品優(yōu)勢

● 高轉(zhuǎn)化效率：>1×108 cfu/μg DNA
● 適用于免復(fù)蘇快速轉(zhuǎn)化

■ 產(chǎn)品組成

基因型: F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1 hsdR17(rk- mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 λ-

■ 存儲條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 使用方法

快速轉(zhuǎn)化流程

1. 解凍感受態(tài)細胞：從-80 ℃取出感受態(tài)細胞，冰上融化約5-10 min，然后立即進行DNA樣品的轉(zhuǎn)化。

2. DNA樣品的轉(zhuǎn)化：每100 μL感受態(tài)可加入0.5-10 μL待轉(zhuǎn)化DNA樣品（例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等），然后輕輕彈擊管底約5-6次，立即冰上靜置孵育1 min。

• 待轉(zhuǎn)化DNA樣品的加入體積不宜超過感受態(tài)細胞體積的1/10。

• 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品后應(yīng)輕柔彈擊混勻，避免使用移液槍劇烈吹打混勻。

3. 熱激處理：冰浴后，將裝有感受態(tài)和DNA樣品的的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激45 s。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰上靜置1 min以快速冷卻。

• 熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過程中禁止晃動離心管。

4. 涂板培養(yǎng)：

（a）若轉(zhuǎn)化質(zhì)粒攜帶Amp（氨芐青霉素）或Chl（氯霉素）抗性，則轉(zhuǎn)化后的感受態(tài)可以免復(fù)蘇，直接取 50-100 μL涂布于對應(yīng)的抗性板上；

（b）若轉(zhuǎn)化質(zhì)粒攜帶其它抗性，例如Kan（卡那霉素）、Spec（壯觀霉素）等，則建議加入900 μL 無抗LB 培養(yǎng)基，將離心管傾斜放置在恒溫搖床中，37℃ 220 rpm復(fù)蘇20 min，再取適量的菌液（如 50-200 μL）涂板，或5000 g，1 min室溫離心，吸棄約900 μL上清，然后用剩余的約100 μL重懸菌液，涂布于對應(yīng)的抗性板上。

• 37℃為常規(guī)復(fù)蘇溫度，若轉(zhuǎn)入質(zhì)粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據(jù)實驗要求設(shè)置合適的溫度。

5. 過夜培養(yǎng)：將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

• 培養(yǎng)前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

• 37℃為常規(guī)培養(yǎng)溫度，若轉(zhuǎn)入質(zhì)粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據(jù)實驗要求設(shè)置合適的溫度。

■ 相關(guān)參數(shù)