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■ 產品簡介

XL1-Blue菌株能保證高拷貝質粒穩(wěn)定復制，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。hsdR17突變導致EcoK核酸內切酶系統缺失，增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質量。 lacIqZΔM15 的存在使XL1-Blue菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108 cfu/μg。

■ 產品優(yōu)勢

● 高轉化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
● 適合于高效的DNA克隆和質粒擴增

■ 產品組成

基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 (rk- mk+) relA1 lac[F' proAB lacIqZΔM15: Tn10(TetR)] 

■ 存儲條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 產品應用

XL1-Blue感受態(tài)適合于高效的DNA克隆和質粒擴增。

■ 使用方法

1. 解凍感受態(tài)細胞：從-80 ℃取出感受態(tài)細胞，冰上融化約5-10 min，然后立即進行DNA樣品的轉化。

2. DNA樣品的轉化：每100 μL感受態(tài)可加入0.5-10 μL待轉化DNA樣品（例如質粒、連接產物或重組產物等），然后輕輕彈擊管底約5-6次，立即冰上靜置孵育30 min。

• 待轉化DNA樣品的加入體積不宜超過感受態(tài)細胞體積的1/10。

• 加入待轉化DNA樣品后應輕柔彈擊混勻，避免使用移液槍劇烈吹打混勻。

• 用于質粒的轉化時可將冰浴時間縮短至5-10 min；用于連接產物或重組產物轉化時，建議冰浴時間為15-30 min以提高轉化效率。

3. 熱激處理：冰浴后，將裝有感受態(tài)和DNA樣品的的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉移至冰上靜置2-3 min以快速冷卻。

• 熱激時間需要精確控制在45-90 s。

• 熱激及轉移至冰浴過程中禁止晃動離心管。

4. 復蘇培養(yǎng)：加入900 μL 室溫或37 ℃預熱的LB培養(yǎng)基（或SOC培養(yǎng)基等），上下顛倒數次混勻，然后將離心管傾斜放置在恒溫搖床中，37℃ 220 rpm復蘇培養(yǎng)45 min。

• 37℃為常規(guī)復蘇溫度，若轉入質粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據實驗要求設置合適的溫度。

5. 收菌涂板：用于質粒轉化時，復蘇后可直接取50-100 μL菌液涂板；用于連接產物或重組產物轉化時，建議先5000 g，1 min室溫離心，吸棄約900 μL上清，然后用剩余的約100 μL重懸菌液，涂布到含相應抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養(yǎng)：將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

• 培養(yǎng)前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

• 37℃為常規(guī)培養(yǎng)溫度，若轉入質粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據實驗要求設置合適的溫度。

■ 相關參數