■ 產品簡介

ArcticExpress(DE3) pRARE2來源于ArcticExpress(DE3)，將具有氯霉素抗性的pRARE2質粒導入ArcticExpress(DE3)細胞中即是ArcticExpress(DE3) pRARE2。ArcticExpress(DE3) pRARE2菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū)，使得ArcticExpress(DE3) pRARE2菌株可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，廣泛用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。ArcticExpress(DE3) pRARE2菌株具有四環(huán)素，慶大霉素，氯霉素抗性；endA1突變有利于質粒DNA的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress(DE3) pRARE2可以表達適應低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60(來自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現(xiàn)出較高活性，在ArcticExpress(DE3) pRARE2細胞中表達時，可降低重組蛋白包涵體的形成，增加可溶重組蛋白的表達量及生物活性，比傳統(tǒng)的原核表達伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更強的促蛋白折疊功能。同時，帶有氯霉素抗性的pRARE2質?？裳a充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應的tRNA，提高外源基因的表達水平。 ArcticExpress(DE3) pRARE2感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達108 cfu/μg DNA。

■ 產品優(yōu)勢

● 高轉化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
● 大大提高外源基因(特別是真核基因)在原核系統(tǒng)中的表達水平
● 可降低重組蛋白包涵體的形成，增加可溶重組蛋白的表達量及生物活性

■ 產品組成

基因型：E. coli B F– ompT hsdS (rB – mB –) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR ] pRARE2 (CamR)

■ 存儲條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 產品應用

ArcticExpress(DE3) pRARE2感受態(tài)細胞適用于外源基因(特別是真核基因)在原核系統(tǒng)中的T7表達。

■ 使用方法

1. 解凍感受態(tài)細胞：從-80 ℃取出感受態(tài)細胞，冰上融化約5-10 min，然后立即進行DNA樣品的轉化。

2. DNA樣品的轉化：每100 μL感受態(tài)可加入0.5-10 μL待轉化DNA樣品（例如質粒、連接產物或重組產物等），然后輕輕彈擊管底約5-6次，立即冰上靜置孵育30 min。

• 待轉化DNA樣品的加入體積不宜超過感受態(tài)細胞體積的1/10。

• 加入待轉化DNA樣品后應輕柔彈擊混勻，避免使用移液槍劇烈吹打混勻。

• 用于質粒的轉化時可將冰浴時間縮短至5-10 min；用于連接產物或重組產物轉化時，建議冰浴時間為15-30 min以提高轉化效率。

3. 熱激處理：冰浴后，將裝有感受態(tài)和DNA樣品的的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉移至冰上靜置2-3 min以快速冷卻。

• 熱激時間需要精確控制在45-90 s。

• 熱激及轉移至冰浴過程中禁止晃動離心管。

4. 復蘇培養(yǎng)：加入900 μL 室溫或37 ℃預熱的LB培養(yǎng)基（或SOC培養(yǎng)基等），上下顛倒數(shù)次混勻，然后將離心管傾斜放置在恒溫搖床中，37℃ 220 rpm復蘇培養(yǎng)45 min。

• 37℃為常規(guī)復蘇溫度，若轉入質粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據(jù)實驗要求設置合適的溫度。

5. 收菌涂板：用于質粒轉化時，復蘇后可直接取50-100 μL菌液涂板；用于連接產物或重組產物轉化時，建議先5000 g，1 min室溫離心，吸棄約900 μL上清，然后用剩余的約100 μL重懸菌液，涂布到含相應抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養(yǎng)：將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

• 培養(yǎng)前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

• 37℃為常規(guī)培養(yǎng)溫度，若轉入質粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據(jù)實驗要求設置合適的溫度。

■ 相關參數(shù)