一、試劑介紹
5-FAM NHS ester（5-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯）是一種常用的綠色熒光標(biāo)記試劑，其CAS號為92557-80-7，分子式為 C??H??NO?，分子量為 473.39 g/mol。它通過琥珀酰亞胺酯（NHS ester）基團(tuán)與生物分子中的氨基（-NH?）特異性反應(yīng)，生成穩(wěn)定的酰胺鍵，從而實現(xiàn)熒光標(biāo)記。
二、試劑詳情
英文名稱：5-FAM NHS ester，5-FAM,SE，5-Carboxyfluorescein NHS ester，5-Carboxyfluorescein,SE，5-FAM,succinimidyl ester
中文名稱：5-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯，5-羧基熒光素活性酯
CAS：92557-80-7
分子式：C25H15NO9
分子量：473.39
激發(fā)波長：515 nm
發(fā)射波長：488 nm
試劑結(jié)構(gòu)式：
規(guī)格：1mg、5mg、10mg（可按需包裝）
純度：95％+
試劑性狀：黃色到橙色固體
溶解性：溶于部分有機(jī)溶液，溶于水。
儲存條件：不超-20℃干燥、避光儲存
注意事項：不可反復(fù)凍融，現(xiàn)配現(xiàn)用！
供應(yīng)商：西安凱新生物科技
三、反應(yīng)特性
反應(yīng)基團(tuán)：NHS ester（琥珀酰亞胺酯），可與伯胺（-NH?）發(fā)生特異性親核取代反應(yīng)。
反應(yīng)條件：中性至弱堿性環(huán)境（pH 7.0-8.5），無需額外縮合劑。
反應(yīng)速率：快速（數(shù)分鐘至數(shù)小時），副反應(yīng)少，標(biāo)記效率高。
特異性：僅與氨基反應(yīng)，不與巰基、羥基等其他基團(tuán)作用。
四、應(yīng)用領(lǐng)域
蛋白質(zhì)標(biāo)記：與賴氨酸殘基的ε-氨基反應(yīng)，用于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能及相互作用研究（如熒光偏振實驗）。
抗體修飾：制備熒光抗體，用于免疫熒光顯微鏡成像、流式細(xì)胞術(shù)分析（如檢測CD4+ T細(xì)胞）。
核酸標(biāo)記：與胺修飾的寡核苷酸反應(yīng)，制備熒光探針，用于熒光原位雜交（FISH）或?qū)崟r定量PCR（qPCR）。
細(xì)胞成像：追蹤細(xì)胞內(nèi)分子動態(tài)（如受體定位、信號傳導(dǎo)）。
毛細(xì)管電泳：作為熒光試劑，提高檢測靈敏度。
熒光小分子合成：制備生物傳感器或檢測金屬離子、酶活性的熒光探針。
五、操作與儲存注意事項
儲存條件：-20℃以下避光保存，避免反復(fù)凍融。
溶解建議：優(yōu)先使用無水DMSO溶解，再快速稀釋至反應(yīng)緩沖液（如PBS）。
反應(yīng)控制：避免酸性條件（抑制NHS酯與氨基的反應(yīng)），目標(biāo)分子的氨基濃度需過量（通常為5-FAM NHS ester的2-5倍）。
純化方法：反應(yīng)后需通過透析、凝膠過濾或離心柱去除未反應(yīng)的試劑，減少背景熒光。
安全防護(hù)：操作時佩戴護(hù)目鏡與防塵口罩，避免接觸皮膚或吸入粉塵。
六、相關(guān)科研試劑
5-diacetate FAM NHS
5-CFDA（5-羧基熒光素二乙酸酯）
5-FITC-Maleimide
Sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester
QuDye dsDNA HS Reagent
Sulfo-Cyanine3.5 carboxylic acid
HEX phosphoramidite
LumiMAG Genomic DNA Blood and Buccal Kit
Fluo-4 AM（綠色熒光鈣指示劑）
AF594-NHS
Rhodamine-N3 chloride
5-FAM hydrazide HCl
5-FAM Me-tetrazine
5-FAM-PEG3-Azide
5-FAM-PEG3-DBCO
西安凱新生物科技編輯小華溫馨提示：該試劑僅限于科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療領(lǐng)域的使用。
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