小鼠15脂加氧酶試劑盒
小鼠15脂加氧酶試劑盒是一款專門用于體外定量檢測小鼠來源生物樣本中15脂加氧酶(15-LOX)活性或含量的專用實驗試劑組合,核心應用于基礎科研領域,尤其適配小鼠炎癥反應、神經(jīng)退行性疾病、脂質代謝異常、鐵死亡相關研究[5][7]。15脂加氧酶是一種催化多不飽和脂肪酸(如花生四烯酸)氧化的關鍵酶,廣泛存在于小鼠巨噬細胞、小膠質細胞、肝組織、肺組織等部位,參與脂質過氧化、炎癥介質合成等生理過程,其活性或含量異常與小鼠多發(fā)性硬化癥、牙周炎、脂質代謝紊亂及鐵死亡相關疾病密切相關,是相關疾病機制研究、藥物靶點篩選的核心檢測指標[5][7][8]。本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)或比色法原理設計,集成了檢測所需全部試劑,具備特異性強、靈敏度高、操作便捷、結果穩(wěn)定、物種針對性強等優(yōu)勢,可快速、精準完成小鼠各類樣本中15脂加氧酶的檢測,為小鼠相關科研實驗提供標準化、可靠的數(shù)據(jù)支撐,適配不同科研場景的檢測需求。
檢測原理
本試劑盒主要采用兩種核心檢測原理,可根據(jù)科研需求靈活選擇,確保檢測精準度與適用性,且專門針對小鼠15脂加氧酶優(yōu)化反應體系,避免物種交叉干擾:
其一為雙抗體一步夾心法ELISA原理:酶標板預先包被小鼠15脂加氧酶特異性捕獲抗體,實驗時依次加入小鼠樣本、標準品及HRP標記的小鼠15脂加氧酶檢測抗體,經(jīng)恒溫溫育后,抗體與樣本/標準品中的15脂加氧酶特異性結合,形成“捕獲抗體-15脂加氧酶-檢測抗體"復合物;經(jīng)徹di
洗滌去除未結合的多余試劑后,加入TMB底物液,TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,加入終止液(硫酸溶液)后變?yōu)辄S色,顏色深淺與樣本中小鼠15脂加氧酶的含量呈正相關,通過酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),結合標準曲線即可計算出樣本中小鼠15脂加氧酶的具體含量[1]。 其二為比色法原理:利用小鼠15脂加氧酶的催化活性,特異性催化花生四烯酸發(fā)生氧化反應,生成脂質氫過氧化物等產(chǎn)物;隨后加入專屬顯色試劑,產(chǎn)物與顯色試劑發(fā)生特異性反應,生成有色化合物,該化合物在特定波長(530-550nm)下有zui大
吸收峰,顏色深淺與樣本中小鼠15脂加氧酶的活性呈正相關,通過酶標儀測定吸光度,結合標準曲線即可定量樣本中15脂加氧酶的活性,適配小鼠低活性樣本的精準檢測[5]。 產(chǎn)品特點
1. 物種特異性強,無交叉干擾:采用小鼠15脂加氧酶專屬特異性抗體及底物,可特異性識別小鼠來源樣本中的15脂加氧酶,有效規(guī)避大鼠、人等其他物種同源蛋白及樣本中雜蛋白的干擾,同時避免脂質類物質的非特異性反應,確保檢測結果的準確性,批內變異系數(shù)CV<5%,板間變異系數(shù)CV<8%,保障實驗數(shù)據(jù)重復性。
2. 靈敏度高,檢測范圍廣:ELISA法檢測范圍通常為0.5-100ng/mL,比色法活性檢測范圍為1-80U/L,靈敏度可達0.2ng/mL,可精準檢測小鼠低濃度、低活性樣本(如小鼠小膠質細胞裂解液、血清)中的15脂加氧酶,滿足不同科研樣本的檢測需求,標準曲線相關系數(shù)R2≥0.99,線性表現(xiàn)優(yōu)異。
3. 操作便捷,效率高效:試劑盒包含檢測所需全部試劑(酶標板、標準品、樣本xi釋液、檢測抗體、底物液、洗滌液、終止液等)[1],無需額外配制核心試劑,實驗流程簡化,全程可在1-2小時內完成,適配96孔板高通量設計,單次可檢測96個樣本,大幅提升實驗效率,新手也可輕松操作。
4. 穩(wěn)定性好,保質期長:試劑經(jīng)嚴格質檢與工藝優(yōu)化,凍干標準品、特異性抗體及底物活性穩(wěn)定,未開封試劑盒按要求儲存可穩(wěn)定保存,稀釋后的試劑可短期冷藏使用,避免反復凍融導致的活性下降[2],確保不同批次實驗結果的一致性,保障實驗重復性。
5. 適配性廣,場景多元:專門適配小鼠樣本檢測,兼容小鼠血清、血漿、組織勻漿(肝、肺、腦、牙周組織等)、細胞裂解液(巨噬細胞、小膠質細胞等)、細胞培養(yǎng)液等多種樣本類型[8],廣泛應用于小鼠炎癥反應、神經(jīng)退行性疾病、脂質代謝、鐵死亡等相關科研領域,適配基礎科研、藥物靶點篩選等實驗場景。
6. 安全便捷,風險可控:優(yōu)化試劑配方,無需氯仿等有毒有機溶劑[8],操作過程更安全,同時配套詳細說明書,明確操作步驟、樣本處理及注意事項[3],降低實驗失誤概率,保障實驗安全與順利進行。
適用樣本類型
本試劑盒專門適配小鼠來源樣本,可滿足小鼠相關科研實驗的多樣化檢測需求,具體適用樣本包括:小鼠血清、血漿(EDTA或肝素抗凝)、組織勻漿(肝組織、肺組織、腦組織、牙周組織等)、細胞裂解液(巨噬細胞、小膠質細胞、成纖維細胞等)、細胞培養(yǎng)液。其中,組織勻漿需用預冷PBS(含蛋白酶抑制劑更佳)制備,低溫離心提取[6][8];細胞樣本需迅速猝滅并冷凍保存,單個樣本細胞數(shù)量建議≥10^6[6];血清/血漿樣本采集后需低溫離心處理,避免溶血,新鮮樣本優(yōu)先檢測。(具體樣本處理方法請參考產(chǎn)品說明書)
儲存與注意事項
(一)儲存條件
1. 未開封試劑盒:需置于2-8℃避光密封保存,避免陽光直射、溫度波動及潮濕環(huán)境,嚴禁冷凍,未開封試劑盒有效期通常為12個月,具體以說明書標注為準[2]。
2. 組分儲存:凍干標準品、小鼠15脂加氧酶特異性抗體、底物液等核心組分需置于-20℃避光保存,避免反復凍融(≤3次),防止活性喪失[2];濃縮洗滌液、樣本xi釋液可在2-8℃冷藏保存;TMB底物液需避光保存,避免氧化失效。
3. 稀釋后試劑:稀釋后的洗滌液、樣本xi釋液可在4℃冷藏保存,1周內用完;稀釋后的標準品、抗體需現(xiàn)配現(xiàn)用,未用完的可短期冷藏,避免反復凍融及光照[3]。
4. 運輸條件:運輸時采用凝膠冷藏包,確保試劑溫度穩(wěn)定在2-8℃,避免劇烈震蕩、暴曬及ji端
溫度,防止試劑失效,尤其注意保護抗體及底物,避免光照直射。 (二)注意事項
1. 實驗全程需嚴格遵循無菌操作規(guī)范,實驗器具需提前高壓滅菌處理[8],加樣時使用無菌槍頭,避免試劑及樣本污染,尤其是細胞裂解液和組織勻漿樣本,污染會導致檢測結果偏高。
2. 試劑使用前需從冰箱取出,置于室溫(25℃左右)平衡30分鐘以上,避免溫差導致冷凝水干擾實驗[3];試劑配制及加樣時動作輕柔,避免劇烈震蕩,防止試劑失效或樣本中小鼠15脂加氧酶變性,抗體與樣本孵育時避免劇烈晃動。
3. 孵育及顯色過程需嚴格控制溫度和時間,尤其是顯色反應需避光進行,避免光照影響顯色效果[3];終止反應后需在10分鐘內完成讀數(shù),防止顏色消退,確保檢測數(shù)據(jù)穩(wěn)定,同時避免過度孵育導致非特異性顯色。
4. 不同批次的試劑不可混用,試劑盒配套試劑需單獨使用,避免與其他試劑盒試劑交叉使用,防止干擾實驗結果[3];實驗結束后,廢棄試劑及耗材需按生物安全規(guī)范妥善處理,避免污染環(huán)境。
5. 操作含硫酸的終止液及顯色試劑時,需佩戴手套、口罩,避免皮膚接觸及吸入,防止刺激傷害;實驗臺面需保持清潔,避免試劑灑落,若不慎接觸皮膚,需立即用大量清水沖洗。
6. 若樣本中小鼠15脂加氧酶活性或含量超出檢測范圍,需適當稀釋后重新檢測,不可直接檢測,以免導致結果偏差;檢測過程中可設置陽性對照和空白對照,確保實驗體系正常,陽性對照孔吸光度需落在標準曲線范圍內,否則提示實驗失效;樣本需新鮮采集處理,避免長時間放置導致15脂加氧酶降解[6]。
訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產(chǎn)品說明書為準。