PK136小鼠X小鼠雜交瘤細(xì)胞

PK136小鼠X小鼠雜交瘤細(xì)胞是免疫細(xì)胞生物學(xué)研究的特色工具細(xì)胞，通過將分泌特定抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合構(gòu)建而成，隸屬于小鼠B細(xì)胞源性雜交瘤細(xì)胞系。該細(xì)胞系因穩(wěn)定分泌抗小鼠NK細(xì)胞表面NK1.1分子的單克隆抗體，成為NK細(xì)胞分離純化、功能調(diào)控及體內(nèi)示蹤的核心工具，在天然免疫研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

生物學(xué)特性上，PK136細(xì)胞呈現(xiàn)典型的雜交瘤細(xì)胞形態(tài)，體外以半貼壁半懸浮方式生長(zhǎng)，部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)呈梭形或多角形，部分懸浮細(xì)胞呈圓形，核質(zhì)比高，核仁明顯，胞質(zhì)豐富呈嗜堿性。其核心功能特征是高效且穩(wěn)定分泌IgG2a亞型單克隆抗體，該抗體特異性識(shí)別并結(jié)合小鼠NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞表面的NK1.1分子（CD161），不與T細(xì)胞、B細(xì)胞等其他免疫細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)。細(xì)胞增殖活性穩(wěn)定，倍增時(shí)間約36-48小時(shí)，保留骨髓瘤細(xì)胞無限增殖特性與B細(xì)胞抗體分泌功能，經(jīng)克隆純化后抗體分泌量可達(dá)10-30μg/mL，通過ELISA或Western Blot可精準(zhǔn)檢測(cè)抗體表達(dá)。

體外培養(yǎng)PK136細(xì)胞的核心是維持其抗體分泌能力，zui適培養(yǎng)環(huán)境為37℃、5% CO?的恒溫恒濕培養(yǎng)箱，推薦使用添加10%胎牛血清（FBS）、1%抗菌藥物混合液的DMEM高糖培養(yǎng)基，添加2mM氨基戊二酸可提升細(xì)胞增殖穩(wěn)定性與抗體分泌量。培養(yǎng)時(shí)需密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)懸浮細(xì)胞密度達(dá)到2×10?-3×10?個(gè)/mL或貼壁細(xì)胞融合度達(dá)70%時(shí)及時(shí)傳代，避免密度過高導(dǎo)致細(xì)胞活性下降。傳代時(shí)無需嚴(yán)格消化，貼壁細(xì)胞用無菌PBS輕柔吹打即可脫落，隨后與懸浮細(xì)胞一同收集，按1:3-1:5比例用新鮮培養(yǎng)基稀釋接種。特別注意：該細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量敏感，需選用低內(nèi)毒素血清；長(zhǎng)期培養(yǎng)需定期通過抗體效價(jià)檢測(cè)驗(yàn)證分泌功能，避免抗體分泌能力衰減。

研究應(yīng)用中，PK136細(xì)胞的價(jià)值集中體現(xiàn)于NK細(xì)胞相關(guān)研究。免疫細(xì)胞分離領(lǐng)域，其分泌的抗NK1.1抗體可通過免疫磁珠分選法或流式細(xì)胞術(shù)分選純化小鼠外周血、脾臟及骨髓中的NK細(xì)胞，純度可達(dá)90%以上，為NK細(xì)胞體外功能研究提供高活性細(xì)胞樣本；NK細(xì)胞功能調(diào)控研究方面，該抗體可特異性激活或封閉NK1.1分子，探究其在NK細(xì)胞活化、細(xì)胞毒性（如殺傷腫瘤細(xì)胞）及細(xì)胞因子分泌（IFN-γ、TNF-α）中的信號(hào)傳導(dǎo)作用；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將PK136抗體腹腔注射小鼠，可實(shí)現(xiàn)體內(nèi)NK細(xì)胞的特異性清除或功能調(diào)控，用于驗(yàn)證NK細(xì)胞在腫瘤免疫、抗感染免疫及自身免疫病中的作用。

此外，在腫瘤免yi治療研究中，PK136抗體可作為NK細(xì)胞激活劑，聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑增強(qiáng)抗腫瘤效果，或用于構(gòu)建NK細(xì)胞過繼免yi治療的體外評(píng)估模型；單克隆抗體制備技術(shù)研究中，PK136細(xì)胞可作為雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)與抗體純化的模式細(xì)胞，優(yōu)化抗體制備工藝。需注意的是，該細(xì)胞分泌的抗體僅識(shí)別小鼠NK1.1分子，無法用于人源NK細(xì)胞研究；長(zhǎng)期體外培養(yǎng)可能出現(xiàn)抗體分泌不均一性，需定期克隆純化。但憑借穩(wěn)定的抗體分泌特性、高特異性的抗原結(jié)合能力，PK136細(xì)胞已成為小鼠NK細(xì)胞研究不ke或缺的工具，為天然免疫機(jī)制解析與免yi治療研發(fā)提供關(guān)鍵支撐。