包被液有哪些?
Vitronectin
Matrigel
是一種從小鼠肉瘤中提取的、可溶的基底膜基質。在室溫或體溫下,它能從液態(tài)凝固成凝膠狀,為細胞生長提供一個模擬體內真實環(huán)境的三維支架。
iPSC培養(yǎng)基
ROCK抑制劑
EDTA溶液
DPBS
IPSC復蘇
預熱平板:提前1h取出包被好的平板,室溫平衡
快速化凍:取出細胞凍存管置于37℃水浴鍋搖晃化凍
離心重懸:將細胞轉移至含培養(yǎng)基的離心管中
ROCKi是救星:離心棄上清,用含ROCKi的iPSC完培重懸細胞
均勻接種:棄掉包被液,接種細胞,十字搖晃平板混勻細胞
IPSC傳代
第一次換液:復蘇后24h將孔內培養(yǎng)液更換為不含ROCKi的完培
看準時機:此后每天換液,直至細胞匯合度長至80-90%可進行傳代
預熱平板:提前1h取出包被好的平板,室溫平衡
消化要輕柔:將傳代細胞的孔內培養(yǎng)液棄掉,加入DPBS輕柔潤洗一遍后棄掉,加入EDTA溶液,放回培養(yǎng)箱中進行消化,消化結束后棄掉EDTA,加入完培終止消化
均勻接種:取一定量細胞進行細胞接種
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