產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品用于快速從各種常見的細(xì)菌中提取總 RNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡單快速，一般只需 30-40 分鐘完成。

2.既可用于革氏陰性細(xì)菌，也可用于革氏陽性細(xì)菌。

3.所 RNA 純度高，OD260/OD280 一般在 2.0 左右。

4.一般不含基因 DNA 和蛋白質(zhì)污染。

5.性價(jià)比高于進(jìn)口同類產(chǎn)品。

6.得到的 RNA 可用于后續(xù) RT-PCR、Northern Blot、芯片分析、體外翻譯、polyA篩選和 RNase 保護(hù)分析等試驗(yàn)。

7.本產(chǎn)品可以進(jìn)行 50 次微量細(xì)菌 RNA 提取。

8.細(xì)菌RNA純化試劑盒（過柱法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

名稱規(guī)格包裝

細(xì)菌 RNA 純化溶液 A25 mL30 mL 棕色玻璃瓶

細(xì)菌 RNA 純化溶液 B25 mL30 mL 本色瓶

溶-菌酶干粉30 mg1.5 mL 本色管

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份1 份

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸，收到貨后，細(xì)菌 RNA 純化溶液 A 長期保存需要放 4℃，溶菌-酶干粉長期保存需要放-20℃，有效期一年。

自備試劑

氯仿。

使用方法：

注意：試驗(yàn)所用的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、耗材等均需要 RNase-free。操作步驟是針對在 1.5 mL塑料離心管中進(jìn)行的微量提取。

1.新鮮配制溶菌-酶溶液：根據(jù)樣品數(shù)量用自備的 TE 緩沖液和本試劑盒提供的溶菌-酶干粉配制合適體積的、濃度為 4 mg/mL 的溶菌-酶溶液，放冰上待用。一次革氏陽性細(xì)菌 RNA 小量提取需要 100 μL 溶菌-酶溶液，一次革氏陰性細(xì)菌 RNA 小量提取需要 10 μL 溶菌-酶溶液。未用完的溶菌-酶溶液不建議保存后重復(fù)使用。

2.在 1.5 mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5 mL新鮮細(xì)菌（細(xì)菌總數(shù)不得超過1E9

個(gè)細(xì)菌）。注意:由于細(xì)菌 RNA 半衰期十分短，只有 2-5 分鐘，所以必須使用最-新鮮的、處于對數(shù)生長期的細(xì)菌才能提到高質(zhì)量的 RNA。細(xì)菌必須立即使用，不能靜置。

3.吸盡液體培養(yǎng)基，如果是革氏陽性細(xì)菌，則加入 100 μL 第 1 步制備的 4 mg/mL的溶菌-酶溶液，徹-底重懸細(xì)菌，常溫放置 5-10 分鐘。如果是革氏陰性細(xì)菌，則加入 90 μL TE 緩沖液和 10 μL 第 1 步制備的 4 mg/mL 的溶菌-酶溶液，徹-底重懸細(xì)菌，常溫放置 3-5 分鐘。

4.加入 0.3 mL 細(xì)菌 RNA 純化溶液 A，用槍充分吹打細(xì)菌沉淀，確保細(xì)菌全部裂解， 沒有塊狀物。此時(shí)裂解物總體積是 0.4 mL。

5.加入約 0.2 倍體積的自備氯仿(10.4 mL 裂解物需 0.1 mL 氯仿)，振蕩器上充分振蕩混均 30 秒。

6. 12,000-15,000×g 室溫離心 3 分鐘。

7.將上清液（約 0.3 mL）轉(zhuǎn)移到新的離心管中。注意：離心后下層有機(jī)相和中間層含有 DNA 和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和 DNA 污染。

8.加入等體積（約 0.3 mL）的細(xì)菌 RNA 純化溶液 B，充分混勻后全部上柱。

9.12,000-15,000×g 室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。

10.加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的 穿透液。一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。但如果樣品 OD260/OD280 比值不高，可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重復(fù)此步一次。

11.室溫 12,000-15,000×g 離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響 RNA 的使用。

12.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的 RNase-free 收集管中，加入 30-100 μL RNA 洗脫液，室溫放置兩分鐘。

13.室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14.RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使 用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的 RNA 分子。

15.RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH 7.5-8.2 之間)檢測其在 OD260 的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA 濃度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/組織用量)。

16.RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。

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