1、用途：

免疫親和柱可選擇性吸附中藥材樣品液中的赭曲霉毒素A，從而對(duì)樣品起到非常針對(duì)性的純化作用，過柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析或氮吹復(fù)溶后用LC-MS/MS檢測(cè)。

2、概述：

赭曲霉毒素A（OhratoxinA，OTA），是由曲霉屬和青霉屬的某些菌種產(chǎn)生的有毒代謝物，是一種具有強(qiáng)腎臟毒和肝臟毒的真菌毒素，并有致畸、致突變和致癌作用。

3、原理：

測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原、抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品經(jīng)過提取、過濾后，緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫赭曲霉毒素A，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

4、包裝組成：

每一個(gè)盒中包括各種規(guī)格的赭曲霉毒素A免疫親和柱及1份說明書。

5、需要的材料但盒中不提供：

5.1設(shè)備及耗材

----HPLC/LC-MS/MS

----氣控操作架

----空氣泵

----天平

----高速均質(zhì)器（轉(zhuǎn)速≥10,000/min）或搖床

----粉碎機(jī)

----分樣篩

----量筒：100mL/10mL

----注射器：20mL

----移液器或移液管：1mL

----均質(zhì)杯（或250mL具塞錐型瓶）

-----樣品瓶

-----量瓶

5.2試劑

----甲醇（CH₃OH）：提取過程用分析純/洗脫過程用色譜純

----氯化鈉（NaCl）：分析純

----鹽酸（HCl）：分析純

----*(NaOH）：分析純

----磷酸氫二鈉（NaH₂PO₄）：分析純

----磷酸二氫鉀（KH₂PO₄）：分析純

----KCl：分析純

----吐溫-20（C₅₈H₁₁₄O₂₆）：分析純

----水（H₂O）：蒸餾水或去離子

6、注意事項(xiàng)：

----使用前，免疫親和柱需回至室溫（22～25℃）。

----親和柱2～8℃儲(chǔ)存，不得凍存。

----請(qǐng)?jiān)谟行掌趦?nèi)使用免疫親和柱。

----須排空親和柱內(nèi)液體再進(jìn)行上樣操作。

----取樣量：根據(jù)需要可以適當(dāng)增加或減少取樣量，注意提取液量要相應(yīng)改變。

----柱容量：柱容量是200ng，當(dāng)樣本中待檢毒素的含量除以稀釋倍數(shù)高于柱容量時(shí)，需要適當(dāng)降低上樣液的體積，重新檢測(cè)。

----pH：親和柱的上樣溶液pH需在6～8之間，若偏離此范圍需要用鹽酸或*調(diào)節(jié)pH。

----上機(jī)檢測(cè)時(shí)的溶劑與流動(dòng)相保持一致可以消除溶劑效應(yīng)的影響。

----赭曲霉毒素可致癌，應(yīng)戴手套口罩等防護(hù)工具操作。

----使用過的容器及標(biāo)準(zhǔn)品溶液用次氯酸鈉溶液（5%V/V）浸泡過夜。

7、試液的配制：

7.1提取液

70%甲醇-水溶液（V甲醇:V水=70:30）：取700mL甲醇，加入去離子水定容至1L。

7.2磷酸鹽緩沖溶液（簡(jiǎn)稱：PBS）

稱取8.00g氯化鈉、1.20g磷酸氫二鈉（或2.92g十二水磷酸氫二鈉）、0.20g磷酸二氫鉀、0.20g KCL，用900mL水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至7.0±0.1，加水稀釋至1000mL。

7.3磷酸鹽吐溫緩沖液（簡(jiǎn)稱：PBST）

取1mL 吐溫-20，PBS緩沖液稀釋定容至1000mL。

8、樣品處理：

----3g±0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過2mm分樣篩），3g氯化鈉于均質(zhì)瓶中，加入60mL的提取液（見7.1）；

----高速均質(zhì)（≥10,000r/min）2min；

----離心10min（8000r/min）；

----取5mL上清液置50mL量瓶中，用PBS緩沖液稀釋至刻度，混勻，離心15min（8000r/min）；

----取20mL上清液過免疫親和柱凈化。

稀釋倍數(shù)：10

9、操作程序：

9.1上樣

----取出免疫親和柱，將注射器筒的下端直接穿透親和柱上

方的塞子，完成注射器筒與親和柱的連接，將其放置在氣控操作架上進(jìn)行固定；

----排空親和柱內(nèi)液體后，取步驟8中上樣液，注入到注射器筒中；

----使液體以1~2滴/秒的速度流出；

9.2洗滌

----待液體排干；

----依次用10mLPBST緩沖液（見7.3），10mL水淋洗免疫親和柱，流速2~3滴/秒；

9.3洗脫

----待液體排干后，取下針筒，吹干親和柱中液體，用1.5mL甲醇洗脫，收集洗脫液于2mL進(jìn)樣瓶中，用水稀釋至刻度，混勻；

----用0.22μm微孔濾器過濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于HPLC分析。

*每次上樣前都要將上次液體排干。

10、結(jié)果判讀：

赭曲霉毒素A的含量=檢測(cè)濃度×稀釋倍數(shù)

11、貯藏條件及有效期：

貯藏條件：2~8℃。

有效期：該產(chǎn)品有效期為18個(gè)月。