單克隆抗體的生產和純化尤其具有挑戰(zhàn)性，抗體蛋白變性與錯誤折疊是生物治療藥物發(fā)生不良結構變化的重要偏差。pH、電導率、壓力、光密度及單一波長紫外光譜等常用方法獲取的數據有限，無法提供特定產品的濃度、雜質或翻譯后修飾相關信息；HPLC 雖能分析這些內容，但受限于樣品制備和分析耗時，無法實現(xiàn)實時分析。拉曼光譜是一種可以檢測和監(jiān)測蛋白質二級結構變化的技術，可以實時放行檢測 (RTRT)有望提高生產效率、降低成本并提高盈利能力。

布魯克在線拉曼光譜儀 HyperFlux™PRO Plus (HFPP)配備流通池監(jiān)測隨著LiCl濃度變化細胞色素C（CytC）結構變化。

圖1 用 LiCl (0 M - 4.2 M) 擾動 CytC光譜區(qū)域 1530-1650 cm^-1 的同步 2D COS 圖。黃色區(qū)域顯示正強度相關區(qū)域，而藍色區(qū)域顯示負強度相關區(qū)域。

圖1  CytC血紅素骨架的Cβ-Cβ對稱伸展相對應的1558 cm^-1帶與1630-1648 cm^-1（血紅素骨架，β片的Cα-Cm對稱拉伸）和1648-1667 cm^-1（α螺旋，轉彎，無序蛋白質二級結構）呈正相關。這證實了LiCl的存在對CytC高階結構特征的擾動。

圖2 1.25mg/mL CytC在緩沖液中的預處理光譜，不含LiCl（紅色）、1.05M LiCl（黃色）、2.1 M LiCl。

圖2顯示了將LiCl加入蛋白質溶液時的1558 cm^-1血紅素帶。隨著添加的LiCl的增加，帶的減少是明顯的。

圖3 變性CytC稀釋系列，校準范圍0-1.7 mg/mL

圖3顯示了變性CytC的光譜，濃度從0-1.7 mg/mL增加的拉曼譜圖。

圖4 天然CytC稀釋系列，校準范圍0-1.7 mg/mL

圖4顯示了天然CytC的譜，濃度從0-1.7 mg/mL增加。蛋白質含量增加的拉曼信號趨勢在視覺上是可識別的，在天然CytC和變性CytC之間是不同的。這進一步證實，高通量拉曼光譜可以根據高階結構的變化很容易地區(qū)分天然和變性CytC。這意味著有可能檢測和量化過程偏移，如下游生物技術DSP過程中的變性，并著眼于實時放行。