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當(dāng)前位置:世聯(lián)博研(北京)科技有限公司>>技術(shù)文章>>結(jié)核分枝桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測實驗
主要用于結(jié)核?。═uberculosis, TB)的輔助診斷和潛伏感染篩查。其核心原理是檢測人體免疫系統(tǒng)(特別是T細胞)對結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)
特異性抗原的應(yīng)答反應(yīng)。
核心原理
當(dāng)人體感染結(jié)核分枝桿菌后,體內(nèi)的特異性T淋巴細胞會“記住"這種細菌的特定抗原(如ESAT-6, CFP-10, TB7.7等)。當(dāng)這些T細胞在體外再次接觸到相同的抗原時,
會被激活并產(chǎn)生反應(yīng),主要是:
1. 釋放細胞因子:如γ-干擾素(IFN-γ)。
2. 增殖:T細胞數(shù)量增加。
目前的檢測方法正是基于測量這種反應(yīng)強度來判斷機體是否曾經(jīng)感染過結(jié)核菌。
主要檢測方法
目前臨床應(yīng)用最GUANG泛的是**γ-干擾素釋放試驗**(Interferon-Gamma Release Assays, IGRAs)。
1. γ-干擾素釋放試驗 (IGRAs)
IGRAs是一種體外血液檢測技術(shù)。它通過測量受試者全血或分離的單核細胞在受到MTB特異性抗原刺激后所產(chǎn)生的IFN-γ水平,來判斷是否存在結(jié)核感染。
商用試劑盒:
T-SPOT.TB: 采用ELISPOT技術(shù),計數(shù)分泌IFN-γ的T細胞數(shù)量(斑點形成細胞數(shù))。
檢測流程簡述:
1. 采血:采集患者靜脈血。
2. 孵育刺激:將血液分別加入不同的培養(yǎng)管中:
* 陰性對照管(Nil):不含抗原,測量本底值。
* 陽性對照管(Mitogen):含有非特異性刺激物,確認(rèn)免疫細胞功能正常。
* 抗原管(TB Antigen):含有MTB特異性抗原(ESAT-6, CFP-10等)。
3. 孵育:在37℃下培養(yǎng)16-24小時。
4. 檢測:使用Bioreader ELISPOT設(shè)備測量IFN-γ的水平。
5. 結(jié)果判讀:
* 陽性:抗原管反應(yīng)值減去陰性對照管值后,超過特定閾值。提示存在結(jié)核感染(潛伏性或活動性)。
* 陰性:抗原管反應(yīng)值很低,且陽性對照管反應(yīng)正常。提示 likely 未感染。
* 不確定/無效:陽性對照管反應(yīng)過低(可能提示免疫系統(tǒng)功能受損)或陰性對照管值過高。結(jié)果無法判斷。
與結(jié)核菌素皮膚試驗(TST)的對比
| 特性 | γ-干擾素釋放試驗 (IGRAs) | 結(jié)核菌素皮膚試驗 (TST/Mantoux Test) |
| 原理 | 檢測體外血液中T細胞對特異性抗原的IFN-γ反應(yīng) | 檢測體內(nèi)對結(jié)核菌素衍生物(PPD)的遲發(fā)型超敏反應(yīng) |
| 抗原 | MTB特異性抗原(ESAT-6, CFP-10等),與BCG和大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌無交叉反應(yīng) | PPD,為多種分枝桿菌共有的抗原,與BCG接種和多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌感染有交叉反應(yīng) |
| 操作 | 抽血,一次完成,體外實驗 | 皮內(nèi)注射,需48-72小時后回醫(yī)院判讀結(jié)果 |
| 主觀性 | 客觀,由機器量化檢測 | 主觀**,依賴操作者的注射技術(shù)和判讀者的經(jīng)驗 |
| 優(yōu)點 | 特異性高、不受BCG接種影響、無需二次就診、結(jié)果客觀 | 價格低廉、操作簡單、無需特殊設(shè)備 |
| 缺點 | 價格昂貴、需要實驗室設(shè)備、血液樣本運輸和處理要求高 | 特異性較低、需二次就診、受BCG接種影響大、主觀性強 |
臨床應(yīng)用與意義
1. 潛伏性結(jié)核感染(LTBI)的診斷與篩查:
這是IGRAs最主要的用途。用于篩查結(jié)核病高危人群(如HIV感染者、器GUAN移ZHI前、使用免疫抑制劑前、醫(yī)務(wù)工作者等)。IG陽性表明感染了結(jié)核菌,但未發(fā)病,
需要評估是否進行預(yù)防性治療。
2. 活動性結(jié)核病的輔助診斷:
可用于支持活動性結(jié)核病的診斷,但**不能區(qū)分潛伏感染和活動性結(jié)核。
陰性結(jié)果有助于排除結(jié)核感染(尤其是在免疫健全的個體中),但免疫功能低下者(如艾滋病患者)可能出現(xiàn)假陰性。
不能單獨用于診斷活動性結(jié)核,必須結(jié)合臨床癥狀、影像學(xué)(如胸部X光)、痰涂片和痰培養(yǎng)等結(jié)果綜合判斷。
3. 特殊人群的應(yīng)用:
兒童:可用于兒童結(jié)核病的診斷,但年齡越?。ㄓ绕涫?lt;5歲),免疫系統(tǒng)越不成熟,檢測性能可能下降。
免疫抑制人群:HIV感染者、器GUAN移ZHI者等,IGRAs的敏感性可能會降低,可能出現(xiàn)假陰性。
優(yōu)點與局限性
優(yōu)點:
高特異性:不受卡介苗(BCG)接種史的影響,與非結(jié)核分枝桿菌的交叉反應(yīng)少。
高敏感性:對活動性結(jié)核病和潛伏感染有較好的敏感性。
便捷性:只需一次抽血,患者依從性好。
客觀性:結(jié)果量化,減少人為誤差。
局限性:
無法區(qū)分LTBI與活動性TB:這是最大的局限性。陽性結(jié)果只能說明有感染,但不能判斷是潛伏還是活動。
成本高:檢測費用遠高于TST。
技術(shù)要求高:需要專業(yè)的實驗室設(shè)備和人員,血液樣本需要在規(guī)定時間內(nèi)處理。
在免疫抑制人群中可能出現(xiàn)假陰性。
存在灰色地帶:有少數(shù)不確定結(jié)果,需要重新評估或檢測。
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| 酶聯(lián)免疫斑點分析儀 | 酶聯(lián)免疫熒光斑點分析儀 |
結(jié)核分枝桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測(主要指IGRAs)是現(xiàn)代結(jié)核病防控中的重要工具。它通過檢測T細胞對MTB特異性抗原的記憶反應(yīng),實現(xiàn)了對結(jié)核感染
的高特異性和高敏感性診斷。盡管它不能區(qū)分潛伏感染和活動性疾病,但其高特異性使其在卡介苗接種普遍的地區(qū)和用于特定人群篩查時,價值尤為突出。醫(yī)生
會根據(jù)患者的具體情況,選擇TST或IGRAs,或二者聯(lián)合使用,并結(jié)合其他檢查結(jié)果來做出綜合判斷。
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