一、普通光學(xué)顯微鏡簡介
顯微鏡可分為電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡兩大類。光學(xué)顯微鏡包括：明視野顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、偏光顯微鏡、熒光顯微鏡、立體顯微鏡等。其中明視野顯微鏡為zui常用普通光學(xué)顯微鏡，其它顯微鏡都是在此基礎(chǔ)上發(fā)展而來的，基本結(jié)構(gòu)相同，只是在某些部分作了一些改變。明視野顯微鏡簡稱顯微鏡。
國內(nèi)顯微鏡主要產(chǎn)家：上海蔡康光學(xué)儀器有限公司 （一）顯微鏡的構(gòu)造
普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造可以分為機械和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分。
圖1-1 顯微鏡構(gòu)造
1.目鏡 2.鏡筒 3. 轉(zhuǎn)換器 4. 物鏡 5. 載物臺 6. 聚光器 7. 虹彩光圈
8. 聚光鏡調(diào)節(jié)鈕 9.反光鏡 10. 底座 11. 鏡臂 12. 標(biāo)本片移動鈕
13. 細(xì)調(diào)焦旋鈕 14. 粗調(diào)焦旋鈕 15.電源開關(guān) 16.光亮調(diào)節(jié)鈕 17.光源
1. 機械系統(tǒng)：
（1） 鏡座Base：在顯微鏡的底部，呈馬蹄形、長方形、三角形等。
（2） 鏡臂Arm：連接鏡座和鏡筒之間的部分，呈圓弧形，作為移動顯微鏡時的握持部分。
（3） 鏡筒Tube：位于鏡臂上端的空心圓筒，是光線的通道。鏡筒的上端可插入接目鏡，下面可與轉(zhuǎn)換器相連接。鏡筒的長度一般為160mm。顯微鏡分為直筒式和斜筒式；有單筒式的，也有雙筒式的。
（4） 旋轉(zhuǎn)器Nosepiece：位于鏡筒下端，是一個可以旋轉(zhuǎn)的圓盤。有3~4個孔，用于安裝不同放大倍數(shù)的接物鏡。
（5） 載物臺Stage：是支持被檢標(biāo)本的平臺，呈方形或圓形。中央有孔可透過光線，臺上有用來固定標(biāo)本的夾子和標(biāo)本移動器。
（6） 調(diào)焦旋鈕：包括粗調(diào)焦鈕Coarse adjustment knob和細(xì)調(diào)焦鈕Fine adjustment knob，是調(diào)節(jié)載物臺或鏡筒上下移動的裝置。
2. 光學(xué)系統(tǒng)
（1）
接物鏡Objective lens，常稱為鏡頭，簡稱物鏡，是顯微鏡中zui重要的部分，由許多塊透鏡組成。其作用是將標(biāo)本上的待檢物進行放大，形成一個倒立的實像，一般顯微鏡有3~4和物鏡，根據(jù)使用方法的差異可分為干燥系和油浸系兩組。干燥系物鏡包括低倍物鏡（4~10x）和高倍物鏡（40~45x），使用時物鏡與標(biāo)本之間的介質(zhì)是空氣；油浸系物鏡（90~100x）在使用時，物鏡與標(biāo)本之間加有一種折射率與玻璃折射率幾乎相等的油類物質(zhì)（香柏油）作為介質(zhì)。
顯微鏡
1——放大倍數(shù) 2——數(shù)值口徑 3——鏡筒長度要求 4——蓋玻片厚度 |
（2） 接目鏡Eyepiece lens：通常稱為目鏡，一般由2~3塊透鏡組成。其作用將由物鏡所形成的實像進一步放大，并形成虛像而印入眼簾。一般顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)目鏡是10x。
（3） 聚光鏡Condenser：位于載物臺的下方，由兩個或幾個透鏡組成，其作用是將由光源來的光線聚成一個錐形光拄。聚光鏡可以通過位于載物臺下方的聚光鏡調(diào)節(jié)旋鈕進行上下調(diào)節(jié)，以求得zui適光度。聚光器還俯有虹彩光圈（Iris diapHragm）,此調(diào)節(jié)錐形光拄的角度和大小，以控制進入物鏡的光的量。
（4） 反光鏡：反光鏡是一個雙面鏡，一面是平面，另一面是凹面，起著把外來光線變成平行光線進入聚光鏡的作用。使用內(nèi)光源的顯微鏡就無需反光鏡。
（5） 光源：日光和燈光均可，以日光較好，其光色和光強都比較容易控制，有的顯微鏡采用裝在底座內(nèi)的內(nèi)光源。
（二）顯微鏡的成像原理
顯微鏡的放大作用是由物鏡和目鏡共同完成的。標(biāo)本經(jīng)物鏡放大后，在目鏡的焦平面上形成一個倒立實像，再經(jīng)目鏡進一步放大形成一個虛像，被人眼所觀察到（圖1-3）。
在油鏡系中，載玻片與鏡頭之間多用香柏油作介質(zhì)。因香柏油的折射率（n=1.51）與玻璃的折射率（n=1.52）幾乎相等，故透過載玻片的光線通過香柏油后，直接進入物鏡，而不發(fā)生折射。兩組物鏡光線通路的區(qū)別如圖1-4所示
圖1-3 顯微鏡成像原理 圖1-4物鏡光線通路
（三）顯微鏡的性能
1. 分辨率和數(shù)值口徑
衡量顯微鏡性能好壞的指標(biāo)主要是顯微鏡的分辨率，顯微鏡的分辨率（Resolving power）是指顯微鏡將樣品上相互接近的兩點清晰分辨出來的能力。它主要取決于物鏡的分辨能力，物鏡的分辨力是所用光的波長和物鏡數(shù)值口徑的函數(shù)。分辨率用鏡頭所能分辨出的兩點間的zui小距離表示，距離越小，分辨能力越好?？捎霉奖硎荆?/div>
物鏡的數(shù)值口徑（Numberical aperture），簡寫為（N.A）：表示從聚光鏡發(fā)出的錐形光柱照射在觀察標(biāo)本上，能被物鏡所聚集的量?？捎霉奖硎荆?/div>
n——標(biāo)本和物鏡之間介質(zhì)的折射率
θ——由光源投射到透鏡上的光線和光軸之間的zui大夾角
光線投射到物鏡的角度越大，數(shù)值口徑就越大。如果采用一些高折射率的物質(zhì)作介質(zhì)，如使用油鏡時采用香柏油作介質(zhì)，則數(shù)值口徑增大，從而提高分辯能力。物鏡鏡筒上標(biāo)有數(shù)值口徑，低倍鏡為0.25，高倍鏡為0.65，油浸鏡為1.25。這些數(shù)值是在其它條件都適宜的情況下的zui高值，實際使用時，往往低于所標(biāo)的值。
2. 放大倍數(shù)、焦距和工作距離
顯微鏡的放大倍數(shù)是物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。放大倍數(shù)一樣時，由于目鏡和物鏡搭配不同，其分辨率也不同。一般來說，增加放大倍數(shù)應(yīng)該是盡量用放大倍數(shù)高的物鏡。物鏡的放大倍數(shù)越大，焦距越短，物鏡和樣品之間的距離（工作距離）便越短。
（四）顯微鏡的使用指南
1. 觀察前的準(zhǔn)備：
顯微鏡的安置：取放顯微鏡時應(yīng)一手握住鏡臂、一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣3~4cm。鏡檢時姿勢要端正。
接通電源，根據(jù)所用物鏡的放大倍數(shù)，調(diào)節(jié)光亮度調(diào)節(jié)鈕、調(diào)節(jié)虹彩光圈的大小，使視野內(nèi)的光線均勻、亮度適宜。
2. 顯微觀察：
（1）接通電源，采用白熾燈為光源時，應(yīng)在聚光鏡下加一藍(lán)色的濾色片，除去黃光。一般情況下，對于初學(xué)者，進行顯微觀察時應(yīng)遵從低倍鏡到高倍鏡再到油浸鏡的觀察程序，因為低倍鏡視野較大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)及確定檢查的位置。
（2）低倍鏡觀察，將做好的酵母標(biāo)本片固定在載物臺上，用標(biāo)本夾夾住，移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下放。旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)器，將10x物鏡調(diào)至光路中央。旋轉(zhuǎn)粗調(diào)焦鈕將載物臺升起，從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡接近標(biāo)本片，然后用目鏡觀察，慢慢降載物臺，使標(biāo)本在視野中初步聚焦，再使用細(xì)調(diào)節(jié)鈕調(diào)節(jié)圖像清晰。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本個部位，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄所觀察的結(jié)果。調(diào)焦時只應(yīng)降載物臺，以免一時的誤操作而損壞鏡頭。注意無論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛的疲勞，也便于邊觀察邊繪圖記錄。
（3）高倍鏡觀察，在低倍鏡下找到合適的觀察目標(biāo)并將其移至視野中心，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光鏡光圈及視野亮度進行適當(dāng)調(diào)節(jié)后微調(diào)細(xì)調(diào)節(jié)鈕使物像清晰，仔細(xì)觀察并記錄。如果，高倍鏡和低倍鏡不同焦，則按照低倍鏡的調(diào)焦方法從新調(diào)節(jié)焦距。
（4）油浸鏡觀察，在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域，用粗調(diào)焦鈕先降載物臺，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣品區(qū)域加一滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)鈕將載物臺小心地上升，使油浸鏡浸在香柏油并幾乎與標(biāo)本片相接。將聚光鏡升至zui高位置并開足光圈。慢慢地降載物臺至視野中出現(xiàn)清晰圖像為止，仔細(xì)觀察并作記錄。
（1）觀察結(jié)束后，先降載物臺，取下載玻片。
（2）用擦鏡紙分別擦拭物鏡和目鏡。
（3）用擦鏡紙拭去鏡頭上的油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，zui后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。
（4）清潔顯微鏡的金屬部件。
（5）將各部分還原，將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，同時把聚光鏡降下，以免物鏡和聚光鏡發(fā)生碰撞危險。
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