化工儀器網(wǎng)
技術文章
在寬波長范圍內(nèi)測定吲哚菁綠的熒光光譜
閱讀：169 發(fā)布時間：2025-11-14在醫(yī)學、生物化學領域通常使用熒光素標記特定分子，以對病變部位進行觀察。吲哚菁綠的熒光峰出現(xiàn)在810 nm 附近，屬于近紅外區(qū)域。因為近紅外光容易穿透生物體，所以經(jīng)常被用于觀察生物體內(nèi)部。
熒光分光光度計的傳統(tǒng)機型難以在大于750 nm 的波長范圍進行測定，而新開發(fā)的島津熒光分光光度計RF-6000 則可在200 nm～900 nm 的寬波長范圍進行測定。并且本儀器還配置自動光譜校正功能，可以自動獲得用于比較的數(shù)據(jù)。本文向您介紹使用RF-6000 對吲哚菁綠進行測定的示例
儀器和三維光譜測定：圖1 為RF-6000 的外觀。RF-6000 帶有自動光譜校正功能，能夠自動獲得熒光和激發(fā)校正光譜，去除儀器固有特性（儀器函數(shù)）的影響。使用傳統(tǒng)機型進行測定時，需要從已測光譜中扣減儀器函數(shù)后進行數(shù)據(jù)處理，而RF-6000 則不需要進行該操作。校正光譜可以用于對不同儀器得到的數(shù)據(jù)進行比較。 將吲哚菁綠粉末溶解到純水中，制備成1.3 mg/L 濃度的水溶液。為了檢測最佳激發(fā)波長，使用LabSolutions RF 軟件的三維光譜功能測定了三維光譜。測定三維光譜時，依次改變激發(fā)波長，并測定熒光光譜，這樣就得到了三維光譜。圖2 為測定結果；表1為測定條件。得到的數(shù)據(jù)中橫軸對應熒光波長Em，縱軸對應激發(fā)長Ex。本測定只需5 分鐘。三維光譜由校正光譜組成。 如圖2 箭頭所示，在坐標Em 808 nm，Ex 780 nm 處出現(xiàn)熒光峰。由圖可知，在780 nm 處的激發(fā)波長下檢測到樣品的強熒光峰。
以三維光譜圖的任意坐標自由截取熒光光譜和激發(fā)光譜。圖3為峰位置下的光譜圖。此時，A 線截取圖對應熒光光譜；B 線截取圖對應激發(fā)光譜。由此可知，熒光波長為808 nm，最佳激發(fā)波長為780 nm。
總結：
綜上所述，使用RF-6000 可在200 nm～900 nm 的寬波長范圍進行測定。并對傳統(tǒng)機型難以測定的810 nm 附近的吲哚菁綠進行了高靈敏測定。另外，還可以通過自動光譜校正功能，實時獲得高精度光譜。今后可期望使用RF-6000 開拓新的應用領域。