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在生命科學(xué)領(lǐng)域，熒光素標(biāo)記的DNA 探針（以下簡稱“熒光探針"）廣泛應(yīng)用于檢測和鑒別特定的DNA。熒光探針會與特定的DNA 進(jìn)行選擇性結(jié)合，因此可以利用熒光標(biāo)記檢測到特定的DNA。因為熒光素有多種類型，掌握熒光探針的熒光波長在檢測DNA 時十分重要。 本文向您介紹使用熒光分光光度計RF-6000 的三維光譜測定功能，對兩種熒光探針進(jìn)行熒光測定的示例

儀器、測定方法和結(jié)果 :

圖1 為RF-6000 的外觀圖。RF-6000 具有三維光譜測定功能和自動光譜校正功能，可以在短時間內(nèi)對較寬的波長范圍進(jìn)行測定。自動光譜校正功能是指不受儀器影響（不使用儀器函數(shù)）自動獲得校正光譜的功能，在測定時可以自動獲得正確的熒光光譜以及激發(fā)光譜。 

本次分析對使用不同熒光素標(biāo)記的熒光探針A、熒光探針B分別進(jìn)行了三維光譜測定。測試三維光譜時，依次改變激發(fā)波長，并測定熒光光譜，這樣就得到了三維光譜。得到的數(shù)據(jù)中橫軸對應(yīng)熒光光譜（Em），縱軸對應(yīng)激發(fā)光譜（Ex）。 圖2 為熒光探針A 的測定結(jié)果；圖3 為熒光探針B 的測定結(jié)果。這些是由校正光譜組成的三維光譜。每個樣品的測定時間約為3 分鐘。如箭頭所示，熒光探針A 主要在①和②處出現(xiàn)熒光峰，熒光探針B 主要在①處出現(xiàn)熒光峰。 熒光探針A（圖2）的峰①于550 nm 處激發(fā)，熒光波長約為600 nm；峰②于510 nm 處激發(fā)，熒光波長約為530 nm。熒光探針B（圖3）的峰①是于550 nm 處激發(fā)，熒光波長約為600 nm。

光譜測定 

以三維光譜圖的任意坐標(biāo)自由截取熒光光譜以及激發(fā)光譜。此時，橫軸方向上截取的光譜將作為熒光光譜；縱軸方向上截取

的光譜將作為激發(fā)光譜。 在熒光探針A 三維光譜（圖2）中，獲得了峰①和峰②的熒光光譜，分別顯示在圖4 和圖5 中。由圖可知，峰①的熒光波長為598 nm；峰②的熒光波長為532 nm。 在熒光探針B 三維光譜（圖3）中，獲得了峰①的熒光光譜和激發(fā)光譜。圖6 和圖7 分別顯示熒光光譜和激發(fā)光譜。由此可知，熒光波長為604 nm，最佳激發(fā)波長為550 nm。 另外，通過三維光譜得到不受儀器影響的校正光譜，由此可檢測正確的熒光波長位置

總結(jié):使用熒光分光光度計測定了熒光探針的三維光譜，并且能夠自動獲得校正光譜。使用傳統(tǒng)機(jī)型獲取校正光譜，需要進(jìn)行手動數(shù)據(jù)處理，而RF-6000 則無需該操作。綜上所述，使用RF-6000可以高精度高效率的進(jìn)行熒光測定