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PROTAC技術(shù)近年來(lái)發(fā)展迅速，在解決傳統(tǒng)"不可成藥"靶點(diǎn)、克服臨床耐藥及提高靶向選擇性方面展現(xiàn)出巨大潛力。雖然目前尚未有PROTAC療法正式上市，但超過(guò)25種PROTAC候選藥物正處于臨床試驗(yàn)階段，其應(yīng)用范圍包括血液系統(tǒng)惡性腫瘤、實(shí)體瘤和自身免疫性疾病等。然而，PROTAC分子的復(fù)雜作用機(jī)制也給檢測(cè)和篩選帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)。正是在這樣的背景下，瑞孚迪（Revvity）公司推出的HTRF（均相時(shí)間分辨熒光）和Alpha（Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay）技術(shù)強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合，為PROTAC研發(fā)提供了檢測(cè)解決方案。
PROTAC檢測(cè)特殊挑戰(zhàn)
PROTAC分子的功能依賴于其誘導(dǎo)靶蛋白與E3連接酶形成三元復(fù)合物，進(jìn)而觸發(fā)泛素-蛋白酶體降解途徑，因此其活性評(píng)估需綜合考察二元結(jié)合、三元復(fù)合物形成、泛素化效率及降解動(dòng)力學(xué)等多個(gè)維度。傳統(tǒng)檢測(cè)方法在此背景下顯現(xiàn)出明顯局限性：
為全面評(píng)估PROTAC活性，現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)需滿足以下要求：
檢測(cè)二元和三元相互作用
定量分析蛋白降解動(dòng)力學(xué)
適應(yīng)高通量篩選需求
均相技術(shù)平特優(yōu)勢(shì)
瑞孚迪的HTRF和Alpha技術(shù)均采用均相檢測(cè)格式，無(wú)需分離步驟即可直接測(cè)量溶液中的生物分子相互作用，這一特性使它們?cè)赑ROTAC研究中具有獨(dú)值：
01高效、無(wú)需洗滌的檢測(cè)流程
采用 “Add-Read" 的均相工作模式，摒棄了ELISA、Western Blot所需的繁瑣步驟以及HiBiT技術(shù)需要前期構(gòu)建細(xì)胞株的情況，極大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，提高了檢測(cè)效率，特別適合高通量篩選。
2出色的靈敏度和穩(wěn)定性
HTRF技術(shù)基于時(shí)間分辨熒光原理，有效消除背景干擾；Alpha技術(shù)基于微珠的化學(xué)放大機(jī)制，可檢測(cè)皮摩爾級(jí)別的微弱相互作用，相較于SPR技術(shù)，這些均相方法在檢測(cè)低親和力的蛋白相互作用和復(fù)雜的三元復(fù)合物方面表現(xiàn)出顯著的靈敏度優(yōu)勢(shì)，能夠有效解決SPR在此類應(yīng)用中信號(hào)響應(yīng)不足的局限性。
3平臺(tái)通用性高，一技多用
僅需一種均相技術(shù)平臺(tái)，即可無(wú)縫評(píng)估PROTAC功能的三個(gè)核心指標(biāo)：二元結(jié)合親和力、三元復(fù)合物形成效率與靶蛋白降解水平。這種集成化能力打破了傳統(tǒng)方法（如SPR、ELISA、Western Blot分別用于不同指標(biāo)）的壁壘，確保了數(shù)據(jù)的一致性和可比性，極大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程并加速了研發(fā)進(jìn)程。
覆蓋PROTAC研發(fā)全流程
二元相互作用：奠定PROTAC功能的分子基礎(chǔ)
PROTAC分子的功能基礎(chǔ)是其同時(shí)與靶蛋白和E3連接酶的結(jié)合能力。瑞孚迪的均相技術(shù)在此環(huán)節(jié)展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，使研究人員能夠研究分子相互作用，無(wú)需分離洗滌步驟，保持了相互作用的真實(shí)性。
HTRF Cereblon binding kit檢測(cè)原理圖（左）和數(shù)據(jù)（右）
三元復(fù)合物形成：解鎖PROTAC機(jī)制的關(guān)鍵步驟
PROTAC技術(shù)的核心在于其能否有效介導(dǎo)并穩(wěn)定靶蛋白與E3連接酶之間的相互作用，形成三元復(fù)合物。瑞孚迪的Toolbox試劑盒通過(guò)雙抗體識(shí)別策略，可特異性、高通量的檢測(cè)三元復(fù)合物的組裝效率與穩(wěn)定性。
HTRF BTK-WT/CRBN PROTAC binding kit檢測(cè)原理圖（左）和數(shù)據(jù)（右）
目標(biāo)蛋白降解動(dòng)力學(xué)：評(píng)估PROTAC的最終功效
蛋白降解是PROTAC功能的體現(xiàn)，也是評(píng)價(jià)其效能的黃金標(biāo)準(zhǔn)。瑞孚迪的蛋白檢測(cè)試劑盒無(wú)需基因工程標(biāo)記，即可直接在天然細(xì)胞體系中定量分析蛋白降解過(guò)程，準(zhǔn)確計(jì)算DC50、Dmax等關(guān)鍵參數(shù)。該無(wú)標(biāo)記優(yōu)勢(shì)使其能夠應(yīng)用于原代細(xì)胞和組織樣本檢測(cè)，為PROTAC研究提供更接近生理環(huán)境的藥效學(xué)數(shù)據(jù)。細(xì)胞消化太耗時(shí)? TryPLUS消化液免終止、免冷凍，隨取隨用，一步搞定!
AlphaLISA SureFire Ultra Human Total KRAS Detection Kit檢測(cè)原理圖
未來(lái)展望
隨著PROTAC技術(shù)的不斷發(fā)展，瑞孚迪的均相技術(shù)平臺(tái)為PROTAC研究人員提供了從早期發(fā)現(xiàn)到臨床前研究的解決方案。專用檢測(cè)試劑盒和優(yōu)化方案將進(jìn)一步增強(qiáng)其在PROTAC研究中的適用性，不僅加速了PROTAC藥物的研發(fā)進(jìn)程，更為理解蛋白降解機(jī)制提供了強(qiáng)大工具，有望推動(dòng)更多突破性療法的誕生。
產(chǎn)品列表（部分）
試劑耗材
消化液推薦
TryPLUS細(xì)胞消化液
? 即開即用：可在4℃或室溫條件下保存，無(wú)需解凍等待，顯著提升實(shí)驗(yàn)效率。
? 穩(wěn)定性：經(jīng)過(guò)改造，無(wú)自切風(fēng)險(xiǎn)，且無(wú)需抑制劑終止反應(yīng)，簡(jiǎn)化操作步驟，降低成本。
? 減少細(xì)胞損傷：有效保護(hù)細(xì)胞表面蛋白，提高消化后的細(xì)胞活率、貼壁效率及功能完整性。
? 性能經(jīng)過(guò)驗(yàn)證：已在上百種細(xì)胞系上進(jìn)行測(cè)試，效果與進(jìn)口品牌相當(dāng)，目前已有數(shù)百家科研機(jī)構(gòu)及藥企穩(wěn)定使用。
? 價(jià)格親民：產(chǎn)化生產(chǎn)，性價(jià)比。
