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在細(xì)胞治療產(chǎn)品的開發(fā)過程中，細(xì)胞活力檢測的準(zhǔn)確性直接影響產(chǎn)品的放行質(zhì)量與最終療效。目前市場上常用的檢測方法包括AO/PI與AO/DAPI等，然而AO/DAPI在模擬真實實驗條件下（如低溫/營養(yǎng)剝奪模型）表現(xiàn)不佳，誤差可達(dá)10%–30%，嚴(yán)重影響結(jié)果的可靠性?！禞ournal of Fluorescence》上發(fā)表的一項研究明確指出：AO/PI染色法在穩(wěn)定性、靈敏度及抗干擾性方面均顯著優(yōu)于AO/DAPI，更適用于細(xì)胞治療領(lǐng)域中對細(xì)胞活力的精準(zhǔn)檢測。瑞孚迪（Revvity）實現(xiàn)AO/PI染色法的商業(yè)化應(yīng)用，瑞孚迪推出全新一代細(xì)胞計數(shù)儀Cellometer Ascend，推動細(xì)胞質(zhì)檢進(jìn)入高信度時代。
AO/PI的三大優(yōu)勢特性[1]
Part.01時間無關(guān)性：染色時長“零影響"
AO/DAPI的局限：在低溫/營養(yǎng)剝奪（LT/ND）模型中，30分鐘內(nèi)死細(xì)胞活力讀數(shù)從26%下降至11%，DAPI需更長時間滲透死細(xì)胞，穩(wěn)定結(jié)果需等待超過30分鐘。
AO/PI的優(yōu)勢：染色時間在0–40分鐘內(nèi)，細(xì)胞活力幾乎無波動，加熱致死（HK）與LT/ND死細(xì)胞活力均穩(wěn)定在0%。
機制解析：PI與DNA雙鏈結(jié)合無序列偏好性，而DAPI偏向結(jié)合AT富集區(qū)，因此PI標(biāo)記更快、更全面，DAPI則需更長時間。
Part.02死細(xì)胞高靈敏度：正交驗證逼近0%
即便在細(xì)胞凋亡/壞死導(dǎo)致DNA斷裂的情況下，碎片化DNA無法被識別為完整細(xì)胞，AO/PI仍可準(zhǔn)確區(qū)分細(xì)胞生死狀態(tài)，為細(xì)胞治療產(chǎn)品的開發(fā)與質(zhì)控提供堅實數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
·AO/PI在5天培養(yǎng)中始終保持~0%活力讀數(shù)，準(zhǔn)確判斷細(xì)胞死亡。
·AO/DAPI持續(xù)高估細(xì)胞活力（HK模型約5%，LT/ND模型從20%緩慢下降），無法全面識別死細(xì)胞。
Part.03抗干擾性：FRET機制杜絕假陽性
AO/PI借助FRET機制實現(xiàn)快速、穩(wěn)定、特異性的死細(xì)胞標(biāo)記，不受染色時長干擾。相反，AO/DAPI染色緩慢且不，隨時間推移不斷產(chǎn)生假陽性信號（AO+/DAPI-），無法真實反映樣本狀態(tài)。
Cellometer Ascend：
更精準(zhǔn)可靠高效
01明場和雙熒光通道，適合多細(xì)胞類型
Cellometer Ascend具有明場、紅/綠熒光兩種通道，兩種通道結(jié)合分析結(jié)果更加真實、準(zhǔn)確?？煞治龆喾N細(xì)胞類型(包括原代細(xì)胞和細(xì)胞系)，可通過臺盼藍(lán)、AO/PI多種染色方法進(jìn)行細(xì)胞活力、細(xì)胞直徑檢測，從而進(jìn)一步評估細(xì)胞質(zhì)量，確保用于治療的細(xì)胞具有良好的活性。02基準(zhǔn)點聚焦/基于圖像的自動聚焦
以確保在不同樣本條件下都能獲得清晰的圖像，基準(zhǔn)點聚焦方式對于低濃度樣品也可以準(zhǔn)確快速檢測，濃度低至2x104個細(xì)胞/mL的樣本（CV<10%）；
369mm2超大成像面積
可捕獲約為血球計數(shù)板4-17倍的采樣面積，最大可達(dá)到69mm2，特別適用于低濃度的細(xì)胞樣本細(xì)胞計數(shù)儀能夠快速、準(zhǔn)確地測定細(xì)胞濃度；
4細(xì)胞輪廓精準(zhǔn)識別
基于細(xì)胞輪廓的專有識別算法，對于成團(tuán)細(xì)胞也能準(zhǔn)確分割。
優(yōu)勢方法+高效平臺
=細(xì)胞治療質(zhì)檢新范式
本研究通過模擬真實生產(chǎn)環(huán)境的低溫/營養(yǎng)剝奪模型證實：AO/PI憑借其時間無關(guān)性、高死細(xì)胞靈敏度與優(yōu)異抗干擾性，為細(xì)胞活力檢測提供了更優(yōu)解。Cellometer Ascend作為該方法的理想搭載平臺，以全自動檢測、高通量處理和精準(zhǔn)算法，為細(xì)胞治療企業(yè)提供從研發(fā)到生產(chǎn)放行的全周期質(zhì)控支持。
