人蛋白激酶G試劑盒
人蛋白激酶G試劑盒(Human Protein Kinase G Kit,PKG Kit),是基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理研發(fā)的體外診斷/科研檢測試劑盒,可特異性檢測人血清、血漿、組織勻漿及細胞培養(yǎng)上清中人蛋白激酶G(Protein Kinase G,PKG)的含量,經(jīng)特異性驗證、靈敏度測試及重復(fù)性實驗確認,無交叉反應(yīng),檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠,無試劑降解、雜菌污染等問題。蛋白激酶G(PKG)是一類依賴環(huán)鳥苷酸(cGMP)的絲an酸/蘇an酸蛋白激酶,核心功能是被cGMP激活后,調(diào)控細胞內(nèi)多種底物磷酸化,參與血管舒張、平滑肌收縮、細胞增殖與凋亡、神經(jīng)信號傳導(dǎo)及免疫調(diào)節(jié)等關(guān)鍵生理過程,其異常表達與心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、炎癥性疾病及腫瘤密切相關(guān),是評估cGMP信號通路激活狀態(tài)、相關(guān)疾病輔助診斷、病情監(jiān)測及藥物篩選的重要指標(biāo)。本試劑盒核心特征是特異性強、操作便捷、檢測快速,可精準(zhǔn)定量樣本中PKG含量,廣泛應(yīng)用于臨床檢驗、分子生物學(xué)科研、心血管藥物篩選、信號通路機制研究等領(lǐng)域,是臨床、科研領(lǐng)域的核心信號通路調(diào)控相關(guān)檢測工具。
檢測原理
本試劑盒的核心檢測原理,基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),聚焦人蛋白激酶G(PKG)的抗原抗體特異性結(jié)合特性,結(jié)合cGMP信號通路相關(guān)指標(biāo)檢測的精準(zhǔn)需求設(shè)計:試劑盒預(yù)先將PKG特異性抗體包被于酶標(biāo)板上,加入待檢測樣本(血清、血漿等)后,樣本中的PKG會與酶標(biāo)板上的抗體特異性結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物;洗滌去除未結(jié)合的雜蛋白、細胞碎片、其他絲an酸/蘇an酸激酶(如PKA)及無關(guān)蛋白后,加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的PKG二抗,與復(fù)合物特異性結(jié)合,形成“包被抗體-PKG-酶標(biāo)二抗"的三明治結(jié)構(gòu);再加入底物液(TMB),HRP催化底物發(fā)生顯色反應(yīng),顯色強度與樣本中PKG的含量呈正相關(guān),通過酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),對照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算出樣本中PKG的具體含量。檢測流程規(guī)范:樣本采集后需及時處理(血清/血漿離心分離、細胞上清收集、組織勻漿破碎離心),按照試劑盒說明書稀釋樣本;酶標(biāo)板平衡至室溫后,依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣本及空白對照,37℃孵育30分鐘;洗滌3-5次后加入酶標(biāo)二抗,37℃孵育20分鐘;再次洗滌后加入底物液,37℃避光孵育15分鐘;加入終止液終止反應(yīng),10分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測定OD值,計算檢測結(jié)果。
產(chǎn)品特點
本產(chǎn)品針對人蛋白激酶G(PKG)檢測需求優(yōu)化制備,核心特點如下:
1. 特異性強:采用高特異性PKG單克隆抗體,可特異性結(jié)合樣本中的PKG,不與PKA、PKC等其他蛋白激酶及雜蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),檢測特異性>99%,確保檢測結(jié)果精準(zhǔn),有效規(guī)避信號通路調(diào)控相關(guān)檢測中的干擾因素;
2. 質(zhì)控嚴格:每批次試劑盒均通過靈敏度、重復(fù)性、特異性及穩(wěn)定性檢測,附完整QC報告,確保批內(nèi)變異系數(shù)(CV)<8%、批間變異系數(shù)(CV)<10%,檢測靈敏度可達0.1ng/mL,符合臨床檢測與科研標(biāo)準(zhǔn);
3. 操作便捷:試劑盒含全套檢測試劑(包被酶標(biāo)板、PKG標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)二抗、底物液、終止液、洗滌液等),無需額外配制核心試劑,步驟簡單,全程可在2.5小時內(nèi)完成,適配常規(guī)實驗室操作,新手易上手;
4. 樣本兼容廣:可適配人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿四種核心樣本類型,樣本用量少(僅需50μL/孔),無需復(fù)雜預(yù)處理,僅需簡單離心、稀釋即可檢測,適配心血管、神經(jīng)、炎癥等相關(guān)科研與臨床多場景樣本;
5. 適配場景廣:可用于高血壓、冠心病、心力衰竭等心血管疾病,帕金森病、阿爾茨海默病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的輔助診斷與療效監(jiān)測,cGMP-PKG信號通路調(diào)控機制研究,心血管保護、神經(jīng)保護及抗炎藥物篩選,以及臨床檢驗、心血管內(nèi)科、神經(jīng)科、分子生物學(xué)科研實驗室的常規(guī)檢測。
適用樣本類型
本試劑盒適配人源樣本的體外檢測與科研實驗,適用樣本類型明確:人血清樣本(靜脈采血后離心分離,避免溶血,溶血會干擾檢測結(jié)果)、人血漿樣本(EDTA或肝素抗凝,離心分離)、人細胞培養(yǎng)上清樣本(血管平滑肌細胞、心肌細胞、神經(jīng)細胞對數(shù)期上清,離心去除雜質(zhì))、人組織勻漿樣本(心肌組織、血管組織、腦組織、炎癥組織等破碎后離心取上清);實驗場景涵蓋高血壓、冠心病、心力衰竭等心血管疾病,帕金森病、阿爾茨海默病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的輔助診斷與療效監(jiān)測,cGMP-PKG信號通路調(diào)控機制研究,心血管保護、神經(jīng)保護及抗炎藥物篩選與效果評估,以及相關(guān)實驗室的常規(guī)檢測。推薦檢測體系:使用試劑盒配套酶標(biāo)板,酶標(biāo)儀(波長450nm),按照說明書步驟操作;樣本稀釋比例為1:10(組織勻漿可根據(jù)濃度適當(dāng)調(diào)整),標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度為0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ng/mL,參考區(qū)間為0.2~1.3ng/mL(具體以說明書為準(zhǔn))。(具體樣本處理方法請參考產(chǎn)品說明書)
儲存與注意事項
1. 試劑盒需全程2-8℃避光冷藏儲存,嚴禁-20℃冷凍或常溫放置,避免溫度波動導(dǎo)致試劑降解、抗體活性喪失;
2. 標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)二抗等試劑開封后,密封冷藏保存,1個月內(nèi)用完,PKG標(biāo)準(zhǔn)品避免反復(fù)凍融,防止其激酶結(jié)構(gòu)破壞,底物液需避光保存;
3. 樣本采集后及時處理,血清/血漿冷藏24小時內(nèi)完成檢測,細胞上清、組織勻漿冷藏或-20℃短期保存,48小時內(nèi)完成檢測,避免樣本變質(zhì)、PKG降解;
4. 操作時嚴格遵循無菌規(guī)范,佩戴防護用品,避免試劑、樣本接觸皮膚黏膜;檢測過程中控制孵育溫度與時間,洗滌充分,避免未結(jié)合試劑殘留導(dǎo)致結(jié)果偏差;
5. 底物液具有潛在刺激性,終止液為酸性溶液,操作時需謹慎,避免接觸衣物與皮膚,檢測完成后按生物安全規(guī)范處理廢棄試劑與酶標(biāo)板;
6. 細胞培養(yǎng)上清樣本需在細胞對數(shù)期采集,離心去除細胞碎片后再進行檢測,避免細胞雜質(zhì)干擾檢測結(jié)果;腦組織、心肌組織等樣本需充分破碎離心,去除組織碎片及雜質(zhì),確保檢測準(zhǔn)確性,同時避免蛋白酶污染導(dǎo)致PKG降解。
訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。