引言

表征結(jié)合事件對(duì)于在分子水平上理解任何生理過(guò)程都至關(guān)重要，現(xiàn)代生化和生物醫(yī)學(xué)研究依賴(lài)于使用等溫滴定量熱法(ITC)精確分析結(jié)合反應(yīng)。ITC是分析分子相互作用最準(zhǔn)確的方法，它能揭示藥物效力和穩(wěn)定性等關(guān)鍵屬性。但如果混合不當(dāng)，ITC數(shù)據(jù)就會(huì)產(chǎn)生偏差、無(wú)法使用。

ITC的原理是將滴定劑混入滴定物中，測(cè)量結(jié)合反應(yīng)過(guò)程中釋放或吸收的熱量，為表征復(fù)雜過(guò)程提供關(guān)鍵的熱力學(xué)數(shù)據(jù)，且無(wú)需改變樣品的結(jié)構(gòu)或組成。由于ITC實(shí)驗(yàn)是在樣品混合過(guò)程中測(cè)量該反應(yīng)，因此ITC數(shù)據(jù)的最終準(zhǔn)確性和可靠性取決于是否進(jìn)行了適當(dāng)?shù)幕旌稀?/span>

混合在ITC實(shí)驗(yàn)中的重要性

1. 確保均勻性

ITC實(shí)驗(yàn)中適當(dāng)?shù)幕旌蠑嚢杩纱_保反應(yīng)物在樣品池中均勻分布。這種均勻性對(duì)于使用ITC精確測(cè)量所有反應(yīng)物的相互作用至關(guān)重要。如果分布不均，樣品可能會(huì)出現(xiàn)局部濃度梯度，即滴定劑存在高濃度區(qū)和低濃度區(qū)。這種差異會(huì)扭曲熱力學(xué)讀數(shù)，導(dǎo)致對(duì)結(jié)合親和力和反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的ITC解讀錯(cuò)誤。

2. 增強(qiáng)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

當(dāng)?shù)味▌┰跇悠分谢旌暇鶆驎r(shí)，實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)會(huì)更快、更充分。由于ITC能準(zhǔn)確表征結(jié)合過(guò)程，這些實(shí)驗(yàn)得出的數(shù)據(jù)質(zhì)量會(huì)更高、更可靠。

ITC實(shí)驗(yàn)中混合不佳的常見(jiàn)錯(cuò)誤及后果

混合不佳的ITC實(shí)驗(yàn)極有可能導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確或無(wú)法使用。混合太慢或不充分會(huì)導(dǎo)致峰值分裂，從而造成分析和數(shù)據(jù)解讀錯(cuò)誤。相反，攪拌速率過(guò)高可能會(huì)損壞樣品，如果操作人員沒(méi)有意識(shí)到樣品損壞，則會(huì)報(bào)告錯(cuò)誤數(shù)據(jù)。

TA儀器如何助您優(yōu)化ITC混合

為避免潛在隱患與問(wèn)題發(fā)生，選擇一款專(zhuān)為簡(jiǎn)化混合而設(shè)計(jì)的等溫滴定量熱儀，可以節(jié)省無(wú)數(shù)因?qū)嶒?yàn)失敗或數(shù)據(jù)丟失而浪費(fèi)的時(shí)間。憑借數(shù)十年的成功創(chuàng)新以及幫助客戶(hù)解決難題的經(jīng)驗(yàn)，TA儀器的Affinity ITC能為您提供更可靠的數(shù)據(jù)。

樣品池設(shè)計(jì)

Affinity ITC的圓柱形樣品池能夠縮短配體到達(dá)其結(jié)合靶標(biāo)所需的距離。該設(shè)計(jì)大大提高了混合效率，同時(shí)消除了在同類(lèi)產(chǎn)品中常見(jiàn)的死區(qū)和截留氣泡。

攪拌槳

Affinity ITC開(kāi)創(chuàng)性的FlexSpin™攪拌槳纖細(xì)而彎曲，可在超低攪拌速率下實(shí)現(xiàn)高效混合。相較于市場(chǎng)上其他ITC產(chǎn)品，Affinity ITC 的攪拌速度比要慢十倍，這一特性使其可以在保護(hù)樣品脆弱結(jié)構(gòu)的同時(shí)確保最高的靈敏度。配合圓柱形樣品池，FlexSpin™攪拌槳可消除混合死區(qū)。經(jīng)過(guò)優(yōu)化后的FlexSpin™攪拌槳，可實(shí)現(xiàn)更好的混合效果、更清晰的峰值和更快的平衡時(shí)間。

注射位置

Affinity ITC采用獨(dú)特的注射器針頭位置，能將滴定劑輸送到攪拌槳的頂部，實(shí)現(xiàn)即時(shí)、高效的混合。而其他量熱儀從底部注射滴定劑，因此滴定劑須向上移動(dòng)才能到達(dá)攪拌槳進(jìn)行混合。使用Affinity ITC，滴定劑能夠更高效地到達(dá)目標(biāo)位置，從而使峰值更清晰，更快地回到基線(xiàn)。

總結(jié)

Affinity ITC采用創(chuàng)新的圓柱形樣品池、FlexSpin™攪拌槳和頂部注入位置，三管齊下，全面優(yōu)化混合效果。這三個(gè)特點(diǎn)使Affinity ITC能夠以125 RPM的平均攪拌速率進(jìn)行混合，顯著低于其他同類(lèi)型儀器。此外，Affinity ITC的技術(shù)可將峰值寬度減少50%之多，從而為用戶(hù)提供易于解讀且值得信賴(lài)的ITC數(shù)據(jù)。雖然混合操作看似復(fù)雜，但Affinity ITC可為您簡(jiǎn)化混合及測(cè)試過(guò)程，助您獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

致謝

本文由TA儀器的Morgan Ulrich和Calliste Scholl撰寫(xiě)，林明申老師校對(duì)。