1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

Shimadzu LC-20AD 高效液相色譜儀；

色譜柱：Shim-pack Scepter C18-120（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31020-06） ；

純水機(jī)：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L 水箱 + 取水器） ；

SHIMSEN Disc HPPTFE 針式過濾器（P/N：380-00341） ；

LC/MS 認(rèn)證樣品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air 移液槍：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（ P/N：00-NAR-100） ；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000） ；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）

1.2 混合對(duì)照品溶液的配制

分別精密稱取 19 種氨基酸和γ-氨基丁酸（內(nèi)標(biāo)）適量，加水或鹽酸水溶液（天冬氨酸、胱氨酸、酪氨酸）溶解并稀釋至 1 mg/mL，得到各單標(biāo)母液；分別精密吸取各單標(biāo)母液 100µL 于 1.5mL 離心管中，精密加入 700µL 硼酸鹽溶液（ 0.4mol/L：取硼酸 12.36g，加水 400 mL 溶解，用 40%*溶液調(diào) pH 至 8.8，加水稀釋至 500mL）和 200µL 的 AQC 溶液（稱取 AQC 適量，加乙腈適量，55°C 加熱 10min，并超聲使溶解后用乙腈稀釋至 1.6mg/mL），渦旋混勻，蓋蓋密封，55°C 加熱 10min，放冷，得到衍生后的各單標(biāo)溶液；分別各取衍生的單標(biāo)溶液 50µL，混勻，備用。（ 注意：半胱氨酸易降解，需要現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)衍生）

本文建立了 19 種氨基酸 AQC 柱前衍生的 HPLC 分析方法。參照 《中國(guó)藥典》四部中的色譜條件并進(jìn)行優(yōu)化，采用色譜柱 Shim-pack Scepter C18-120 分析經(jīng) AQC 衍生后的 19 種氨基酸，結(jié)果顯示，目標(biāo)物峰型對(duì)稱， 分離度均大于 1.5，且重復(fù)性良好，滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。此方法可為 19 種蛋白氨基酸的檢測(cè)提供參考。