賽默飛色譜及質(zhì)譜
【藥典】生物藥-液相色譜-超高分辨質(zhì)譜用于多糖蛋白結(jié)合疫苗中 CDAP及其相關(guān)物質(zhì)的研究
檢測(cè)樣品:疫苗
檢測(cè)項(xiàng)目:CDAP及其相關(guān)物質(zhì)
方案概述:本文以異脲鍵連接反應(yīng)常用的活性劑 CDAP 為例,講解多糖活性劑的變化研究。我們以液相色譜超高分辨質(zhì)譜為基礎(chǔ),研究了不同來源的 CDAP 原料、不同存儲(chǔ)介質(zhì)(水溶液、不同濃度鹽酸溶液和不同濃度堿水溶液)和疫苗成品中 CDAP的轉(zhuǎn)換。
多糖蛋白結(jié)合疫苗是疫苗中非常重要的類型 [1]。與多糖疫苗 相比,多糖蛋白結(jié)合疫苗具有更高的免疫活性和更寬的使用 范圍。例如,肺炎多糖疫苗僅適用于較大的兒童和老人預(yù)防 肺炎球菌感染,但將肺炎多糖與破傷風(fēng)類病毒 / 白喉類病毒 / CRM197 結(jié)合生產(chǎn)的肺炎多糖結(jié)合疫苗可用于更低年齡兒童 (嬰幼兒)的免疫接種 [2-4]。雖然,結(jié)合疫苗具有優(yōu)良的性 能,但也需要更為復(fù)雜的工藝,例如多糖與載體蛋白的結(jié)合 工藝。常見的結(jié)合工藝包括胺還原法、酰胺化反應(yīng)、二硫鍵 連接反應(yīng)和異脲鍵連接反應(yīng)等 [5]。在這些結(jié)合工藝中,多糖 活化劑是不可少的試劑。例如,異脲鍵連接反應(yīng)中使用的 多糖活化劑 1- 氰基,4- 二甲氨基吡啶四氟硼酸鹽(1-cyano- 4-dimethylamino-pyridinium,CDAP)。它可用于腦膜炎球菌 結(jié)合疫苗、流行性嗜血桿菌結(jié)合疫苗、肺炎球菌結(jié)合疫苗及 A 族乙型溶血性鏈球菌疫苗等多糖蛋白結(jié)合疫苗的工藝 [6]。 CDAP 可以活化多糖,但也具有在堿性條件下容易快速水解 的特點(diǎn)(水解成 4- 二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine, DMAP),如圖 1 所示)。

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