隨著癌癥治療領(lǐng)域的不斷創(chuàng)新，免疫細胞療法（Immune Cell Therapy）逐漸成為一種備受關(guān)注的治療方法，旨在通過激活或增強患者自身的免疫系統(tǒng)來對抗癌癥。這類療法的核心思想是利用免疫細胞的天然殺傷功能，增強其對癌細胞的識別和清除能力。免疫細胞療法有多種形式，常見的包括細胞因子誘導的殺傷細胞療法、T細胞療法、CAR-T細胞療法（嵌合抗原受體T細胞療法）、CAR-NK細胞療法（嵌合抗原受體自然殺傷細胞療法）等。

其中，CAR-T（Chimeric AntigenReceptor T-Cell immunotherapy）細胞療法是一種通過將患者的T細胞重新編程，使其表達針對特定腫瘤抗原的嵌合抗原受體（CAR），從而增強T細胞對腫瘤細胞的靶向識別和攻擊能力的治療方法。這種療法已在多種血液腫瘤（如急性淋巴細胞白血病、非霍奇金淋巴瘤等）中取得了顯著療效。

Keywords: CAR-T; Lentiviral; Lentiviral Vector；Tracer Lentivirus

一、CAR-T細胞療法的制備

一般來說，制備CAR-T細胞的過程可分為以下幾個關(guān)鍵步驟：

圖片來源：Dana-Farber Cancer Institute-CAR T-細胞臨床試驗幫助多發(fā)性骨髓瘤患者恢復健康

分選（T細胞分離）

制備CAR-T細胞的第一步是從患者的外周血中的白血細胞分離出T細胞。通常采用免疫磁珠分選法或流式細胞術(shù)等技術(shù)，從血液中提取出富含CD3+的T細胞。為了確保細胞的純度，分選過程需要十分精細，確保得到足夠數(shù)量的高質(zhì)量T細胞。

激動（T細胞激活）

提取出的T細胞在體外需要進行激活，通常采用CD3/CD28活化擴增試劑盒（CD3/CD28 T Cells Activation /Expansion Kit）來激活T細胞。激活后的T細胞會進入活躍狀態(tài)，準備進行基因轉(zhuǎn)染。通過這一過程，T細胞的功能得到增強，有助于后續(xù)的基因改造和擴增。

轉(zhuǎn)染（基因編輯）

激活后的T細胞將接受基因轉(zhuǎn)染，以使其表達嵌合抗原受體（CAR）。這一過程通常使用慢病毒載體（Lentiviral vector）將CAR基因?qū)氲絋細胞中。慢病毒是一種有效的基因轉(zhuǎn)導工具，其優(yōu)點在于能夠穩(wěn)定地將目標基因（如CAR基因）整合入細胞基因組中。慢病毒通過感染T細胞并將CAR基因轉(zhuǎn)染進T細胞的DNA中，使T細胞能夠長期表達CAR。CAR基因包括一個抗體的單鏈可變片段（scFv），使T細胞能夠識別腫瘤細胞表面的特定抗原，并通過激活T細胞的信號傳導區(qū)域來啟動免疫反應。如圖2所示。慢病毒轉(zhuǎn)染具有高效、穩(wěn)定的特點，使得CAR基因能夠在T細胞中長期表達。

圖片來源：Singapore CAR-T細胞療法

擴增（細胞增殖）

轉(zhuǎn)染后的CAR-T細胞將進入擴增階段，通過添加IL-2等生長因子促進細胞增殖。此過程的目的是確保在最終注入患者體內(nèi)時，能夠提供足夠數(shù)量的CAR-T細胞。擴增過程需在無菌的條件下進行，保證細胞的質(zhì)量與數(shù)量。

質(zhì)控（質(zhì)量控制）

在回輸患者前。在制備過程中，質(zhì)量控制環(huán)節(jié)至關(guān)重要。制備出來的CAR-T細胞需進行嚴格的檢測，以確保細胞的純度、活性、轉(zhuǎn)染效率等符合治療標準。此外，還需要檢測是否存在細胞污染或不良反應，以確保細胞回輸入原患者體后的安全性和治療效果。

二、慢病毒轉(zhuǎn)染免疫細胞中的重要性

在免疫細胞療法中，慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)起到了至關(guān)重要的作用，尤其在基因編輯和細胞工程化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。慢病毒載體的優(yōu)勢，使其成為當前免疫細胞療法中最-廣泛使用的基因轉(zhuǎn)導工具。

慢病毒（Lentivirus）是一類能夠感染人類及其他哺乳動物細胞的病毒類型，它來源于HIV-1，經(jīng)過安全改造后成為了研究人員轉(zhuǎn)導目標基因的完-美工具。它隸屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科， 逆轉(zhuǎn)錄病毒的特點是它們攜帶RNA基因組，并通過一種名為“逆轉(zhuǎn)錄酶”的蛋白將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA，然后通過整合酶將DNA整合到宿主細胞的基因組中。由于慢病毒能把自身序列整合到宿主基因組，使得基因能長期穩(wěn)定表達，并且能夠感染分裂和非分裂的細胞?？蒲腥藛T基于慢病毒這些特征，通過對慢病毒進行了安全性改造，慢病毒的基因被分散在了三個質(zhì)粒，包裝質(zhì)粒（提供病毒的核心結(jié)構(gòu)蛋白gag和反轉(zhuǎn)錄酶pol），包膜質(zhì)粒（提供包膜糖蛋白VSV-G用于穿透細胞膜），以及帶有目標基因的穿梭質(zhì)粒?？茖W家們還敲除了HIV-1的vif、vpr、vpu和nef基因， 以及在穿梭質(zhì)粒中3’LTR的U3序列，使HIV-1失去復制能力。使其無法在產(chǎn)生新的病毒顆粒，同時使用水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）替代了在包膜質(zhì)粒中的env編碼的包膜糖蛋白來擴大慢病毒感染細胞的類型。在減少了生物安全風險后，已經(jīng)被用作基因?qū)氩溉閯游锛毎妮d體，由于其具有高效、持久表達的特點，廣泛應用于基因治療、基因編輯和細胞生物學研究等領(lǐng)域。

圖片來源：product/ 慢病毒包裝以及慢病毒轉(zhuǎn)染293T細胞過程示意圖

【高效的基因轉(zhuǎn)導能力】

慢病毒載體（Lentiviral vector）能有效地將目標基因（如CAR基因）轉(zhuǎn)入免疫細胞中，并能夠?qū)⒒蚍€(wěn)定整合到細胞基因組中，使得CAR基因能夠在細胞分裂和增殖過程中持續(xù)表達。這種高效的轉(zhuǎn)染能力是確保免疫細胞療法成功的基礎(chǔ)。

【較低的免疫原性】

與其他病毒載體相比，慢病毒的免疫原性較低，因此使用慢病毒轉(zhuǎn)染免疫細胞時，患者的免疫系統(tǒng)對病毒的免疫反應相對較弱。這有助于減少不良反應，尤其是在細胞回輸后的長期生存中，避免了過度的免疫排斥反應。

【對免疫細胞的高適應性】

慢病毒載體（Lentiviral vector）能夠有效轉(zhuǎn)染多種類型的免疫細胞，尤其適用于T細胞和NK細胞等。通過慢病毒的轉(zhuǎn)染，免疫細胞可以獲得針對腫瘤的特異性識別能力，從而增強其殺傷腫瘤的能力。

【轉(zhuǎn)染效應細胞對靶細胞的精準性】

在免疫細胞療法中，轉(zhuǎn)染效應細胞是指那些通過轉(zhuǎn)染后能夠表達CAR并發(fā)揮抗腫瘤作用的免疫細胞。慢病毒能夠精準地將CAR基因轉(zhuǎn)入這些效應細胞，使其能夠識別并攻擊腫瘤靶細胞。靶細胞是指被這些免疫細胞識別并殺傷的腫瘤細胞。通過慢病毒轉(zhuǎn)染，免疫細胞可以增強對腫瘤細胞的特異性識別和殺傷能力，從而提高治療效果。

鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，為縮短免疫細胞療法客戶轉(zhuǎn)染的復雜性和提高基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的成功性，開發(fā)了慢病毒包裝試劑盒（Lentivirus Packaging Kit）及慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent），為客戶提供一站式解決方案！

三、IPHASE慢病毒產(chǎn)品

IPHASE慢病毒包裝試劑盒（IPHASE Lentivirus Packaging Kit）包含了進行慢病毒包裝（Lentivirus Packaging）所需的全部核心試劑，極大簡化了實驗流程，節(jié)省了時間和精力。此試劑盒包括：

· Lentivirus Packaging Plasmid Mix

· Transfect Reagent

· eGFP Plasmid

· IPHASE Lentivirus Concentration Reagent

該試劑盒真正實現(xiàn)了精簡試驗！無需繁瑣的試劑準備，僅需對照說明書便可高效完成慢病毒包裝。試劑盒的獨-特優(yōu)勢在于：包裝時間短、病毒濃度高、操作簡便，非常適合慢病毒包裝的初學者使用。每一組試劑都經(jīng)過嚴格質(zhì)量檢測，確保實驗結(jié)果準確、可靠、重現(xiàn)性強，從而顯著提高轉(zhuǎn)染效率和病毒載體的穩(wěn)定性，為您的免疫細胞制備提供強有力的技術(shù)支持。

此外，為節(jié)省客戶成本，IPHASE同時開發(fā)、生產(chǎn)了慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent），為廣大客戶提供了一種快捷、簡便的濃縮解決方案。只需將慢病毒上清液與濃縮試劑混合，進行簡單的孵育步驟，再通過標準離心機離心，即可快速富集慢病毒顆粒。無須超速離心機，這對大多數(shù)實驗室用戶來說，是一個便捷且經(jīng)濟的選擇。

· 濃縮快速：濃縮過程僅需1小時即可完成。

· 提升滴度：該試劑能夠?qū)⒉《据d體滴度提高10-100倍，同時減少材料損失，確保您獲得高效的病毒載體。

· 簡便易操作：操作簡單，無需復雜設(shè)備和長時間孵育，極大提升工作效率。

簡而言之，IPHASE慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent）不僅能顯著提高轉(zhuǎn)染效率，還能為免疫細胞制備提供高質(zhì)量的病毒載體支持，是日常實驗、臨床前研究及其他應用領(lǐng)域不-可或-缺的優(yōu)異產(chǎn)品！

綜上所述，免疫細胞療法，特別是CAR-T細胞和CAR-NK細胞療法，代表了現(xiàn)代腫瘤治療的新方向。通過精細的細胞分選、激活、轉(zhuǎn)染、擴增和質(zhì)控等工藝，科學家能夠為患者制備出高效、安全的免疫細胞產(chǎn)品，從而實現(xiàn)對腫瘤的精準治療。而慢病毒轉(zhuǎn)染作為其中的核心技術(shù)，因其高效、穩(wěn)定的特性，在CAR-T和CAR-NK細胞的制備過程中起到了至關(guān)重要的作用。隨著技術(shù)的不斷進步，免疫細胞療法有望為更多患者提供全新的治療選擇，帶來更大的臨床價值。隨著技術(shù)的不斷進步，免疫細胞療法在未來有望為更多癌癥患者帶來革命性的治療希望。

與此同時，IPHASE為滿足基因轉(zhuǎn)導、基因表達和疾病研究等多個領(lǐng)域客戶的需求，不僅提供慢病毒包裝試劑盒和慢病毒濃縮液，還在客戶不同需求的基礎(chǔ)上分別使用綠色熒光蛋白（Green fluorescent protein， GFP）、紅色熒光蛋白mCherry和Luciferase熒光素酶對Lentivirus進行包裝，形成示蹤病毒（Tracer Lentivirus），方便客戶對目標細胞進行體外和/或體內(nèi)的位置追蹤，確定目標細胞靶向性！

GFP是從水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白質(zhì)，能夠在紫外光或藍光的激發(fā)下發(fā)出明亮的綠色熒光，被廣泛用于細胞標記和追蹤。通過將GFP基因包裝到Lentivirus中，研究人員能夠轉(zhuǎn)導GFP進入體外實驗中的目標細胞基因，實時監(jiān)測目標細胞，并通過熒光顯微鏡進行可視化分析。mCherry是一種紅色熒光蛋白，廣泛應用于雙標記實驗中，尤其在與GFP聯(lián)合使用時。mCherry的發(fā)射波長較長，在紅光激發(fā)下能夠發(fā)出明亮的紅色熒光。這使得它成為了與GFP等其他熒光標記物配合使用的理想選擇。研究人員可通過同時使用GFP和mCherry示蹤病毒來轉(zhuǎn)導不同的細胞，研究人員可以在同一實驗中觀察不同細胞的行為，為復雜的生物過程提供更多的可視化信息。因此，GFP和mCherry均為體外進行目標細胞實時追蹤監(jiān)測的有效熒光蛋白！

而Luciferase是一種能催化熒光素底物發(fā)光的酶，廣泛應用于細胞和動物模型中的基因表達檢測和動態(tài)監(jiān)測。Luciferase的優(yōu)勢在于，它不依賴于外源熒光染料，而是通過底物（熒光素D-Luciferin）和Luciferase產(chǎn)生反應來產(chǎn)生可被檢測的光信號，Luciferase的發(fā)光信號具有高靈敏度和較長的發(fā)光時間。Luciferase常用于體內(nèi)實驗中，尤其是用于監(jiān)測腫瘤生長、藥物反應、感染過程等動態(tài)生物學研究。

鑒于此，IPHASE為滿足不同客戶體外和/或體內(nèi)試驗對于目標細胞追蹤的要求，在此基礎(chǔ)上，開發(fā)了GFP和Luciferase及mCherry和Luciferase兩款已包裝好的示蹤用病毒，客戶可根據(jù)試驗需求分別選擇示蹤病毒，也可搭配使用，省時省力，提高效率，是實時追蹤監(jiān)測目標細胞動態(tài)的又一大利器！

四、IPHASE免疫療法相關(guān)產(chǎn)品

除了應用于CAR-T或CAR-NK等的慢病毒相關(guān)產(chǎn)品外，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，在支持CGT創(chuàng)新療法等其它領(lǐng)域也不遺余力，開發(fā)生產(chǎn)了經(jīng)白細胞單采術(shù)分離的白細胞和PBMC及多種免疫細胞分離試劑盒，助力免疫細胞療法蓬勃發(fā)展！

IPHASE產(chǎn)品均具有以下優(yōu)勢，且每批次產(chǎn)品可為您出具IPHASE自行驗證的COA數(shù)據(jù)。

安全性

IPHASE提供產(chǎn)品的捐獻者/動物體均為健康供體，經(jīng)過預篩選，且病毒檢測為陰性（HIV-1/2,HBV,HCV,梅毒）。

合規(guī)性

IPHASE提供捐獻者簽署的知情同意書，來源清晰可溯源。

專業(yè)性

IPHASE提供的經(jīng)白細胞單采術(shù)所得的產(chǎn)品，均由專業(yè)人員操作執(zhí)行，每個批次的產(chǎn)品均提供相應COA，且全程冷鏈運輸，安全、快速保證產(chǎn)品質(zhì)量。

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IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗，推出了多領(lǐng)域、多種類的高-端科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者咨詢。

發(fā)    文    章    得    獎    勵

凡使用本公司產(chǎn)品，在國內(nèi)及國際刊物上發(fā)表論文（論文發(fā)表日起一年內(nèi)），并注明產(chǎn)品屬于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 匯智和源生物技術(shù)（蘇州）有限公司所有，即可申請獎勵。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同，給予不同金額獎品：

非SCI論文及IF≤5分，500元禮品；

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